利拉魯肽對(duì)ApoE---小鼠動(dòng)脈粥樣硬化形成過程的影響.pdf

1、研究目的：
　　利用載脂蛋白E（Apolipoprotein E，ApoE）基因敲除小鼠，予以高脂飼料喂養(yǎng)，構(gòu)建動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)模型。探討在AS形成過程中，縫隙連接蛋白37（connexin37，cx37）表達(dá)的改變情況以及胰高血糖素樣肽-1(glucagon-like peptide1，GLP-1)受體激動(dòng)劑利拉魯肽對(duì)小鼠血脂及AS形成過程的影響。
　　研究方法：
　　將19只SP

2、F級(jí)雄性ApoE-/-小鼠（6周齡）隨機(jī)分成三組，分別用普通飼料、高脂飼料、高脂飼料+利拉魯肽飼養(yǎng)，飼養(yǎng)至18周齡后取標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。
　　以眼球取血法取小鼠血液離心后檢測(cè)血清中低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、甘油三酯、總膽固醇。將分離了小鼠血清后的血液沉淀重懸，用淋巴細(xì)胞分離液分離出小鼠的外周血單個(gè)核細(xì)胞（Peripheral Blood Mononuclear Cell，PBMC），提取蛋白后凍存，以Western blot法檢測(cè)P

3、BMC上Cx37的表達(dá)。取血液標(biāo)本同時(shí)留取小鼠動(dòng)脈樣本，用4℃含肝素的 PBS灌洗左側(cè)心腔及動(dòng)脈腔內(nèi)殘血，后換4℃的多聚甲醛溶液繼續(xù)灌注，充分固定后再小心分離小鼠主動(dòng)脈，以蘇丹Ⅳ染色、HE染色了解小鼠AS斑塊形成情況，免疫熒光觀察不同組小鼠AS斑塊病變內(nèi)血管內(nèi)皮細(xì)胞層Cx37的表達(dá)情況。
　　研究結(jié)果：
　　1.ApoE-/-小鼠的體重變化
　　經(jīng)過12周不同飼養(yǎng)后，A組小鼠體重為28.667±0.963g，B組小鼠體

4、重為26.250±1.364g，C組小鼠體重為22.943±1.196g。在飼養(yǎng)的第1—8周，普通喂養(yǎng)與高脂喂養(yǎng)小鼠間體重?zé)o明顯差異，從飼養(yǎng)的第9周起，C組（高脂喂養(yǎng)+利拉魯肽）小鼠的體重顯著低于A組（普通喂養(yǎng)）及B組（高脂喂養(yǎng)），P＜0.05。
　　2. ApoE-/-小鼠外周血的生化指標(biāo)
　　經(jīng)過12周不同處理后，A組小鼠的血清HDL為1.592±0.851，B組小鼠的HDL為2.928±2.407，C組小鼠的HDL為1

5、.430±0.457，三組間小鼠血清的HDL無明顯差異。B組的LDL水平（8.695±4.191）高于A組（4.423±1.838）及C組（6.174±4.841），B組顯著高于A組（P＜0.05），B組與C組間差異未達(dá)顯著水平。B組的甘油三酯水平（13.220±7.636）顯著高于A組（1.988±0.950）及C組（1.144±0.0.696）（P＜0.05），A、C兩組間無顯著差異。雖然B組總膽固醇水平（26.223±18.812

6、）高于其他兩組（A組11.292±4.835，C組14.079±5.635），但差異未達(dá)顯著水平（P＞0.05）。
　　3. ApoE-/-小鼠PBMC Cx37的表達(dá)
　　A組小鼠PBMC的Cx37表達(dá)水平為0.594±0.435，高于B組（0.274±0.128）及C組（0.272±0.123），但差異未達(dá)顯著水平（P＞0.05），B組與C組小鼠間Cx37表達(dá)水平無明顯差異。
　　4.小鼠血管的蘇丹Ⅳ染色
　

7、　A組主動(dòng)脈管腔面較光滑，很小部分有著色，基本呈現(xiàn)內(nèi)膜本色，表明基本無形成AS斑塊。B組主動(dòng)脈內(nèi)膜斑塊狀隆起處被染成猩紅色，無斑塊處呈現(xiàn)內(nèi)膜本色，紅白分明。表明B組主動(dòng)脈內(nèi)膜在大體標(biāo)本上出現(xiàn)明顯的AS斑塊。C組主動(dòng)脈內(nèi)膜斑塊狀隆起處被染成淡紅色，著色較B組明顯減少，無斑塊處呈現(xiàn)內(nèi)膜本色。表明 C組主動(dòng)脈內(nèi)膜在大體標(biāo)本上出現(xiàn) AS斑塊較 B組要少。AS病變最先出現(xiàn)在主動(dòng)脈根部，其次為主動(dòng)脈弓部和動(dòng)脈分叉處，隨后在胸主動(dòng)脈段也可觀察到AS病

8、變。
　　5.小鼠血管的HE染色
　　A組主動(dòng)脈內(nèi)膜光滑、完整、無增厚，內(nèi)皮下無脂質(zhì)沉積，中膜平滑肌細(xì)胞排列整齊。B組主動(dòng)脈內(nèi)膜下層可見較多脂質(zhì)斑塊形成，各斑塊內(nèi)有大量脂肪細(xì)胞，泡沫細(xì)胞，管腔明顯狹窄，中膜平滑肌細(xì)胞顯著紊亂，表明B組主動(dòng)脈形成AS斑塊。C組主動(dòng)脈內(nèi)膜下層可見少許脂質(zhì)斑塊形成，斑塊內(nèi)少量脂肪細(xì)胞，泡沫細(xì)胞，管腔有少許狹窄，中膜平滑肌細(xì)胞排列尚整齊。綜上結(jié)果顯示：一、使用高脂飲食可誘導(dǎo)出ApoE-/-小鼠AS模

9、型。二、C組斑塊較B組少，但較A組多。表明在同等高脂飲食下，使用利那魯肽干預(yù)后可減少斑塊。
　　6.小鼠AS斑塊病變內(nèi)血管內(nèi)皮細(xì)胞Cx37的表達(dá)情況
　　激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)示：小鼠胸主動(dòng)脈血管內(nèi)膜上cx37在內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)，當(dāng)其表達(dá)量較高時(shí)，可通過其點(diǎn)狀熒光信號(hào)輕易的識(shí)別出每個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞的完整輪廓。在使用GLP-1注射干預(yù)的情況下，AS小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞cx37的表達(dá)量升高。提示，GLP-1可以上調(diào)血管內(nèi)皮細(xì)胞cx37的表達(dá)。<