耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌的流行病學(xué)及耐藥機(jī)制研究.pdf

1、目的:(1)了解碳青霉烯類耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌(CRAB)的臨床分布、耐藥現(xiàn)狀及分子流行病學(xué)特征，為臨床合理使用抗菌藥物，預(yù)防和控制耐藥菌株的流行提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。(2)探討插入序列ISAbal、碳青霉烯酶及外排泵AdeABC系統(tǒng)與鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)碳青霉烯類藥物耐藥的關(guān)系。
　　方法:(1)收集湖南地區(qū)2012年4月～2013年3月10家綜合醫(yī)院臨床分離的270株碳青霉烯類藥物耐藥的鮑曼不動(dòng)桿菌;K-B法檢測(cè)菌株對(duì)18種抗菌藥物的敏感性;藥

2、敏結(jié)果以軟件WHONET5.6進(jìn)行分析。(2)采用重復(fù)序列引物聚合酶鏈反應(yīng)(REP-PCR)分析來(lái)自不同醫(yī)院的91株CRAB同源性。(3)改良Hodge試驗(yàn)檢測(cè)碳青霉烯酶;雙紙片協(xié)同試驗(yàn)檢測(cè)金屬β-內(nèi)酰胺酶;多重PCR檢測(cè)OXA-51、OXA-23、OXA-58、OXA-24等碳青霉烯酶基因及IMP、VIM和SIM等金屬β-內(nèi)酰胺酶基因;PCR檢測(cè)插入序列ISAbal-OXA-23、ISAbal-OXA-51及轉(zhuǎn)座子Tn2006、Tn2

3、008基因，并對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序及BLAST分析。(4)采用美羅培南多步法誘導(dǎo)性耐藥試驗(yàn)體外誘導(dǎo)敏感鮑曼不動(dòng)桿菌以獲得對(duì)碳青霉烯類藥物耐藥的菌株;E-test法定量檢測(cè)誘導(dǎo)前后菌株的敏感性;CCCP抑制試驗(yàn)篩查外排泵;PCR及測(cè)序分析誘導(dǎo)前后AdeABC系統(tǒng)的調(diào)控基因adeS、adeR及主要碳青霉烯酶基因的變化;熒光定量PCR檢測(cè)誘導(dǎo)前后adeA、adeB、adeR和adeS基因mRNA的表達(dá)量。
　　結(jié)果:(1)270株CRAB

4、主要分離自呼吸道標(biāo)本(78.90％)，其次為創(chuàng)面分泌物(10.74％);科室分布以重癥監(jiān)護(hù)室(ICU)為主(50.0％)，其次為神經(jīng)外科(7.78％)、神經(jīng)內(nèi)科(7.41％)和燒傷科(7.41％)。在檢測(cè)的18種藥物中，14種藥物耐藥率超過(guò)90.0％。哌拉西林耐藥率最高(100.0％)，頭孢哌酮/舒巴坦的耐藥率最低(48.9％)。(2)91株CRAB共分為A、B、C、D、E、F、G7個(gè)型別，菌株數(shù)分別為79株、4株、2株、2株、1株、2

5、株、1株;A型又分為A1和A2兩個(gè)亞型，分別為46株和33株;所有被檢測(cè)醫(yī)院均出現(xiàn)A型菌株。(3)270株CRAB中，改良Hodge試驗(yàn)陽(yáng)性156株，陽(yáng)性率57.8％;金屬酶表型檢測(cè)均為陰性;所有菌株均檢測(cè)到OXA-51基因，267株菌檢測(cè)到OXA-23基因，1株檢測(cè)到OXA-58基因，未檢測(cè)到OXA-24、IMP、VIM、SIM基因。41株對(duì)碳青霉烯類藥物敏感的鮑曼不動(dòng)桿菌OXA-51基因均陽(yáng)性，OXA-23、OXA-58、OXA-2

6、4均陰性。267株菌的OXA-23基因上游均檢測(cè)到插入序列ISAbal，所有OXA-51基因上游均未檢測(cè)到ISAbal;在檢測(cè)的91株CRAB中，Tn2006陽(yáng)性40株菌，Tn2008均為陰性。(4)親代敏感菌株S25595和S7257美羅培南MIC分別為0.38和0.25μg/ml，誘導(dǎo)后MIC均＞32μg/ml;與親代敏感株相比，誘導(dǎo)耐藥株adeA、adeB、adeR和adeS基因的mRNA表達(dá)量上升2.45倍～9.44倍，而調(diào)控基

7、因adeS、adeR沒(méi)有基因突變或插入序列。
　　結(jié)論:(1)碳青霉烯類藥物耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌多重耐藥十分嚴(yán)重;(2)本地區(qū)臨床分離CRAB存在克隆流行，以A型為主。(3) OXA-51和OXA-23型碳青霉烯酶是本地區(qū)鮑曼不動(dòng)桿菌的主要碳青霉烯酶;ISAbal-OXA-23是鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)碳青霉烯類藥物耐藥的重要機(jī)制，且主要通過(guò)轉(zhuǎn)座子Tn2006進(jìn)行傳播。(4)外排泵AdeABC系統(tǒng)高表達(dá)與鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)美羅培南耐藥密切相關(guān)，其表