甘草酸二銨對LPS干預(yù)人牙周膜成纖維細(xì)胞表達(dá)PGE2及MMP-1的影響.pdf

1、目的:體外建立人牙周膜成纖維細(xì)胞模型，研究甘草酸二銨對人牙周膜成纖維細(xì)胞炎癥損傷后的調(diào)控作用，為臨床牙周病的治療提供新的實驗資料及理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 ①運(yùn)用原代組織塊法對人牙周膜成纖維細(xì)胞進(jìn)行分離、培養(yǎng)，觀察人牙周膜成纖維細(xì)胞的生物學(xué)特性，采用免疫組織化學(xué)方法對細(xì)胞進(jìn)行抗角蛋白及抗波形絲蛋白抗體檢測，對其來源進(jìn)行鑒定;建立穩(wěn)定的人牙周膜成纖維細(xì)胞體外模型。
　　 ②選取成功培養(yǎng)的4～8代細(xì)胞，爬片后，

2、以不同濃度的LPS分別對人牙周膜成纖維細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，觀察24h后人牙周膜成纖維細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化，并運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法檢測PGE2及MMP-1的表達(dá)變化情況，利用醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)對結(jié)果進(jìn)行圖像分析和數(shù)據(jù)收集，篩選出LPS的最佳干預(yù)濃度，用于后續(xù)實驗。
　　 ③利用②中篩選的最佳的LPS濃度干預(yù)人牙周膜成纖維細(xì)胞，同時用不同濃度的甘草酸二銨(0μ g/ml、0.1μ g/ml、1μ g/ml、10μ g/ml、50μ g/ml、1

3、00μ g/ml)干預(yù)人牙周膜成纖維細(xì)胞，觀察24h后人牙周膜成纖維細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化，并運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法檢測PGE2及MMP-1的表達(dá)變化情況，利用醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)對結(jié)果進(jìn)行圖像分析和數(shù)據(jù)收集，采用單因素方差分析法，對經(jīng)甘草酸二銨及LPS干預(yù)后的人牙周膜成纖維細(xì)胞中PGE2及MMP-1的表達(dá)特征進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。
　　 結(jié)果:
　　 ①人牙周膜成纖維細(xì)胞運(yùn)用組織塊法進(jìn)行培養(yǎng)，能夠成功建立穩(wěn)定的人牙周膜成纖維細(xì)胞的體外模型

4、，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞呈長梭形或星形，運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法染色顯示細(xì)胞抗波形絲蛋白抗體陽性，抗角蛋白抗體陰性，源自中胚層的成纖維細(xì)胞特性被典型的表現(xiàn)出來;進(jìn)行傳代培養(yǎng)后，4～8代細(xì)胞活力非常好，增殖速度很快，形態(tài)也很規(guī)則。
　　 ②PGE2及MMP-1在經(jīng)LPS干預(yù)后表達(dá)結(jié)果呈陽性，并隨著LPS濃度的增高，PGE2及MMP-1的表達(dá)量有上調(diào)趨勢，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05，并且在LPS濃度為10μ g/ml時，PGE2及

5、MMP-1的表達(dá)量最強(qiáng)，所以把10μ g/ml的LPS作為最佳干預(yù)濃度，用于后續(xù)實驗。
　　 ③用不同濃度的甘草酸二銨均能夠下調(diào)用最佳濃度(10μ g/ml) LPS干預(yù)的人牙周膜成纖維細(xì)胞表達(dá)PGE2及MMP-1，并且隨甘草酸二銨濃度的增加PGE2及MMP-1的表達(dá)量一直呈現(xiàn)逐漸下調(diào)趨勢，結(jié)果顯示:差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05。
　　 結(jié)論:
　　 ①采用組織塊法能夠成功建立人牙周膜成纖維細(xì)胞體外模型，這種

6、方法操作簡便，成功率較高，并且能夠較好地反應(yīng)原組織的生物學(xué)特性，4～8代細(xì)胞性能穩(wěn)定適用于實驗研究。
　　 ②PGE2及MMP-1在經(jīng)LPS干預(yù)后人牙周膜成纖維細(xì)胞其表達(dá)結(jié)果表明，PGE2及MMP-1參與了牙周炎的發(fā)生和發(fā)展，在牙周炎的發(fā)展進(jìn)程中顯著上調(diào)，所以我們選擇這兩個因子來觀察甘草酸二銨對牙周病的發(fā)展進(jìn)程可能起到的調(diào)控作用。
　　 ③甘草酸二銨對LPS干預(yù)人牙周膜成纖維細(xì)胞炎癥損傷過程中表達(dá)PGE2及MMP-1有重