甘草酸二銨對LPS干預人牙周膜成纖維細胞表達PGE2及MMP-1的影響.pdf

1、目的:體外建立人牙周膜成纖維細胞模型，研究甘草酸二銨對人牙周膜成纖維細胞炎癥損傷后的調(diào)控作用，為臨床牙周病的治療提供新的實驗資料及理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 ①運用原代組織塊法對人牙周膜成纖維細胞進行分離、培養(yǎng)，觀察人牙周膜成纖維細胞的生物學特性，采用免疫組織化學方法對細胞進行抗角蛋白及抗波形絲蛋白抗體檢測，對其來源進行鑒定;建立穩(wěn)定的人牙周膜成纖維細胞體外模型。
　　 ②選取成功培養(yǎng)的4～8代細胞，爬片后，

2、以不同濃度的LPS分別對人牙周膜成纖維細胞進行干預，觀察24h后人牙周膜成纖維細胞的形態(tài)學變化，并運用免疫組織化學方法檢測PGE2及MMP-1的表達變化情況，利用醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)對結(jié)果進行圖像分析和數(shù)據(jù)收集，篩選出LPS的最佳干預濃度，用于后續(xù)實驗。
　　 ③利用②中篩選的最佳的LPS濃度干預人牙周膜成纖維細胞，同時用不同濃度的甘草酸二銨(0μ g/ml、0.1μ g/ml、1μ g/ml、10μ g/ml、50μ g/ml、1

3、00μ g/ml)干預人牙周膜成纖維細胞，觀察24h后人牙周膜成纖維細胞的形態(tài)學變化，并運用免疫組織化學方法檢測PGE2及MMP-1的表達變化情況，利用醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)對結(jié)果進行圖像分析和數(shù)據(jù)收集，采用單因素方差分析法，對經(jīng)甘草酸二銨及LPS干預后的人牙周膜成纖維細胞中PGE2及MMP-1的表達特征進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。
　　 結(jié)果:
　　 ①人牙周膜成纖維細胞運用組織塊法進行培養(yǎng)，能夠成功建立穩(wěn)定的人牙周膜成纖維細胞的體外模型

4、，在倒置顯微鏡下觀察細胞呈長梭形或星形，運用免疫組織化學方法染色顯示細胞抗波形絲蛋白抗體陽性，抗角蛋白抗體陰性，源自中胚層的成纖維細胞特性被典型的表現(xiàn)出來;進行傳代培養(yǎng)后，4～8代細胞活力非常好，增殖速度很快，形態(tài)也很規(guī)則。
　　 ②PGE2及MMP-1在經(jīng)LPS干預后表達結(jié)果呈陽性，并隨著LPS濃度的增高，PGE2及MMP-1的表達量有上調(diào)趨勢，差異具有統(tǒng)計學意義，P＜0.05，并且在LPS濃度為10μ g/ml時，PGE2及

5、MMP-1的表達量最強，所以把10μ g/ml的LPS作為最佳干預濃度，用于后續(xù)實驗。
　　 ③用不同濃度的甘草酸二銨均能夠下調(diào)用最佳濃度(10μ g/ml) LPS干預的人牙周膜成纖維細胞表達PGE2及MMP-1，并且隨甘草酸二銨濃度的增加PGE2及MMP-1的表達量一直呈現(xiàn)逐漸下調(diào)趨勢，結(jié)果顯示:差異具有統(tǒng)計學意義，P＜0.05。
　　 結(jié)論:
　　 ①采用組織塊法能夠成功建立人牙周膜成纖維細胞體外模型，這種

6、方法操作簡便，成功率較高，并且能夠較好地反應原組織的生物學特性，4～8代細胞性能穩(wěn)定適用于實驗研究。
　　 ②PGE2及MMP-1在經(jīng)LPS干預后人牙周膜成纖維細胞其表達結(jié)果表明，PGE2及MMP-1參與了牙周炎的發(fā)生和發(fā)展，在牙周炎的發(fā)展進程中顯著上調(diào)，所以我們選擇這兩個因子來觀察甘草酸二銨對牙周病的發(fā)展進程可能起到的調(diào)控作用。
　　 ③甘草酸二銨對LPS干預人牙周膜成纖維細胞炎癥損傷過程中表達PGE2及MMP-1有重