消退素D1對(duì)LPS誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞COXs及其產(chǎn)物PGE2和PGD2的影響.pdf

1、本研究共分為三部分。
　　 第一部分 LPS刺激肺成纖維細(xì)胞后COXs及其產(chǎn)物PGE2和PGD2表達(dá)的時(shí)程變化
　　 目的:探討LPS刺激HFL-1及原代鼠肺成纖維細(xì)胞后COXs(COX-1和COX-2)及其產(chǎn)物PGE2，PGD2表達(dá)的時(shí)程變化
　　 方法:
　　 在體外培養(yǎng)HFL-1（人胚肺成纖維細(xì)胞株）或原代培養(yǎng)肺成纖維細(xì)胞，將HFL-1或原代培養(yǎng)大鼠肺成纖維細(xì)胞隨機(jī)均勻接種到六孔板:分別以LPS刺激

2、6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)后提取細(xì)胞蛋白標(biāo)本及細(xì)胞培養(yǎng)上清液標(biāo)本，分別檢測(cè)在LPS刺激后不同時(shí)間點(diǎn)COX1/COX-2和PGE2/PGD2的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:
　　 檢測(cè)COX-2蛋白表達(dá)情況發(fā)現(xiàn)，LPS刺激HFL-1后，COX-2蛋白表達(dá)呈雙峰，分別在第6小時(shí)和第48小時(shí)。LPS刺激原代大鼠肺成纖維細(xì)胞后，COX-2蛋白表達(dá)亦呈雙峰，分別在第6小時(shí)和第48小時(shí)，且第二個(gè)峰較第一個(gè)峰更明顯。與此

3、同時(shí)，以ELISA檢測(cè)PGE2和PGD2表達(dá)水平，在HFL-1和原代大鼠肺成纖維細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，PGE2表達(dá)均在第6小時(shí)組達(dá)最高峰，相反，PGD2表達(dá)在第48小時(shí)達(dá)最高水平。LPS刺激HFL-1及原代大鼠肺成纖維細(xì)胞后COX-1蛋白表達(dá)無明顯變化。
　　 結(jié)論:
　　 LPS刺激肺成纖維細(xì)胞后COX-2蛋白呈雙峰表達(dá)，開始在第6小時(shí)，第二高峰在第48小時(shí);而COX-1蛋白的表達(dá)無明顯變化。與此同時(shí)，伴隨PGE2表達(dá)高峰在第6

4、小時(shí)，而PGD2的表達(dá)高峰在第48小時(shí)。
　　 第二部分 消退素D1對(duì)LPS刺激肺成纖維細(xì)胞后第6小時(shí)和第48小時(shí)COXs及其產(chǎn)物PGE2和PGD2表達(dá)的影響
　　 目的:探討消退素D1對(duì)LPS刺激HFL-1及原代大鼠肺成纖維細(xì)胞后第6小時(shí)和第48小時(shí)COXs及其產(chǎn)物PGE2，PGD2表達(dá)的影響
　　 方法:
　　 1、消退素D1對(duì)LPS刺激HFL-1細(xì)胞后6小時(shí)COXs及其產(chǎn)物PGE2，PGD2表達(dá)的影

5、響。實(shí)驗(yàn)分為七組:1）正常對(duì)照組;2）LPS刺激組;3) LPS+RvD1(10nM)組;4）LPS+RvD1(50nM)組;5)LPS+RvD1(100nM)組;6）LPS+乙醇組;7）RvD1(100nM)組。消退素D1對(duì)LPS刺激原代大鼠肺成纖維細(xì)胞后6小時(shí)COXs及其產(chǎn)物PGE2，PGD2表達(dá)的影響體。實(shí)驗(yàn)分為五組:1）正常對(duì)照組;2）LPS刺激組;3）LPS+RvD1(100nM)組;4)LPS+乙醇組;5）RvD1(100n

6、M)組。
　　 2、消退素D1對(duì)LPS刺激HFL-1細(xì)胞后48小時(shí)COXs及其產(chǎn)物PGE2，PGD2表達(dá)的影響體。實(shí)驗(yàn)分為七組:1）正常對(duì)照組;2）LPS刺激組;3）LPS+RvD1(10nM)組;4)LPS+RvD1(50nM)組;5）LPS+RvD1(100nM)組;6)LPS+乙醇組;7）RvD1(100nM)組。消退素D1對(duì)LPS刺激原代大鼠肺成纖維細(xì)胞后48小時(shí)COXs及其產(chǎn)物PGE2，PGD2表達(dá)的影響體。實(shí)驗(yàn)分為五

7、組:1）正常對(duì)照組;2）LPS刺激組;3）LPS+RvD1(100nM)組;4）LPS+乙醇組;5）RvD1(100nM)組。
　　 所有實(shí)驗(yàn)組提取標(biāo)本后，檢測(cè)COX1/COX-2和PGE2/PGD2的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:
　　 1.在研究消退素D1對(duì)LPS刺激HFL-1細(xì)胞后6小時(shí)COXs及其產(chǎn)物表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)中，消退素D1能夠劑量依賴性抑制COX-2蛋白表達(dá)。消退素D1同樣能夠顯著抑制LPS刺激原代大鼠肺

8、成纖維細(xì)胞后6小時(shí)COX-2蛋白表達(dá)。然而，消退素D1對(duì)LPS刺激HFL-1及原代大鼠肺成纖維細(xì)胞后6小時(shí)COX-1蛋白表達(dá)均無明顯影響。另外，通過ELISA檢測(cè)以上各實(shí)驗(yàn)組中細(xì)胞培養(yǎng)上清液PGE2和PGD2表達(dá)水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在HFL-1細(xì)胞株實(shí)驗(yàn)中，消退素D1能劑量依賴性降低PGE2表達(dá)水平，在原代鼠肺成纖維細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，100nM消退素D1能明顯降低PGE2表達(dá)水平。相反，雖然LPS刺激HFL-1及原代大鼠肺成纖維細(xì)胞后6小時(shí)PGD

9、2表達(dá)水平增加，但消退素D1對(duì)其影響均不明顯。
　　 2.在LPS刺激HFL-1細(xì)胞后48小時(shí)實(shí)驗(yàn)中，消退素D1能夠劑量依賴性增加COX-2蛋白表達(dá)。消退素D1同樣能夠顯著增加LPS刺激原代鼠肺成纖維細(xì)胞后48小時(shí)COX-2蛋白表達(dá)。然而，消退素D1對(duì)LPS刺激HFL-1及原代鼠肺成纖維細(xì)胞后48小時(shí)COX-1蛋白表達(dá)均無明顯影響。另外，同樣檢測(cè)以上各實(shí)驗(yàn)組中細(xì)胞培養(yǎng)上清液中PGE2和PGD2表達(dá)水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在HFL-1細(xì)胞

10、株實(shí)驗(yàn)中，消退素D1能劑量依賴性增加PGD2表達(dá)水平，在原代大鼠肺成纖維細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，100nM消退素D1能明顯增加PGD2表達(dá)水平。相反，消退素D1對(duì)LPS刺激HFL-1及原代大鼠肺成纖維細(xì)胞后48小時(shí)PGE2表達(dá)水平均無明顯影響。
　　 結(jié)論:
　　 消退素D1能明顯抑制LPS刺激肺成纖維細(xì)胞6小時(shí)后COX-2及其產(chǎn)物PGE2的表達(dá)，相反，卻能明顯增加LPS刺激肺成纖維細(xì)胞48小時(shí)后COX-2及其產(chǎn)物PGD2的表達(dá)。<

11、br>　　 第三部分 消退素D1雙向調(diào)控LPS刺激原代大鼠肺成纖維細(xì)胞后COX-2表達(dá)的作用機(jī)制
　　 目的:探討消退素D1雙向調(diào)控LPS刺激原代大鼠肺成纖維細(xì)胞后COX-2表達(dá)的作用機(jī)制。
　　 方法:
　　 1.研究LPS刺激原代大鼠肺成纖維細(xì)胞6小時(shí)和48小時(shí)后是否通過ERK1/2或PI3K/Akt信號(hào)通路介導(dǎo)，通過分別給予ERK1/2(UO126)和PI3K/Akt(LY294002)通路的特異性抑制劑

12、后檢測(cè)COX-2蛋白表達(dá)水平。
　　 2.消退素D1對(duì)LPS刺激原代大鼠肺成纖維細(xì)胞后PI3K/AKT和ERK1/2通路活化的影響，通過檢測(cè)了p-AKT和p-ERK1/2水平。
　　 結(jié)果:
　　 1.LPS刺激原代大鼠肺成纖維細(xì)胞6小時(shí)后COX-2蛋白表達(dá)部分通過ERK1/2和PI3K/Akt信號(hào)通路介導(dǎo);然而LPS刺激原代大鼠肺成纖維細(xì)胞48小時(shí)后COX-2蛋白表達(dá)并非通過ERK1/2和PI3K/Akt信號(hào)通