MTHFR基因G1793A多態(tài)性與大腸癌中TopoⅡ表達的相關性.pdf

1、目的:
　　大腸癌是目前死亡率較高的惡性腫瘤[1],近幾年其發(fā)病率和死亡率逐漸上升,并且發(fā)病年齡有年輕化趨勢。化療在大腸癌中有著不可替代的重要作用,尤其對于失去手術機會的晚期大腸癌患者來說,化療可能是其唯一治療手段。雖然不斷研制出新的化療藥物,然而治療結果卻不盡如人意,給患者帶來了巨大的經濟負擔和痛苦。近年來研究證實,多藥耐藥基因(multi-drug resistance,MDR)表達產物DNA拓撲異構酶Ⅱ(TopoⅡ)是造成大

2、腸癌化療失敗以及早期復發(fā)的主要原因,是形成化療耐藥性的物質基礎。DNA拓撲異構酶Ⅱ(DNA topoisomeraseⅡ,TopoⅡ)既是某些細胞毒藥物作用的靶點,又是多藥耐藥的重要靶酶,介導多種化療藥物的MDR。由TopoⅡ介導的耐藥細胞無MDR基因的擴增與過量表達,為導致多藥耐藥形成的重要途徑。因此研究大腸癌患者組織中 TopoⅡ的表達情況與大腸癌臨床病理學特征之間的關系有十分重要的臨床意義。目前報道了幾種亞甲基四氫葉酸還原酶(MT

3、HFR)基因的單核苷酸多態(tài)性(SNP),其中MTHFR G1793A是亞甲基四氫葉酸還原酶基因新近發(fā)現(xiàn)的一個多肽位點,它是 MTHFR基因1793位的堿基鳥嘌呤(G)被腺嘌呤(A)替換,從而使密碼594上的精氨酸被谷氨酰氨替換,與大腸癌有著密切的關系。我們試圖通過研究確定亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因 G1793A多態(tài)性與該患者大腸癌組織中多藥耐藥基因(MDR)的表達產物TopoⅡ表達之間的關系,闡明MTHFR基因G1793A多

4、態(tài)性與大腸癌化療敏感性最關鍵的因素 TopoⅡ之間的關系,旨在尋找到早期預測大腸癌化療敏感性的指標,為臨床制定個體化的化療方案提供有益的信息。
　　方法:
　　用免疫組織化學方法(S-P)檢測95例患者大腸癌組織中TopoⅡ的表達情況,并分析其與大腸癌各臨床病理學特征(包括性別、年齡、腫瘤大小、發(fā)病部位、分化程度、有無淋巴結轉移、Duke’s分期)的關系,探討TopoⅡ在大腸癌發(fā)展中的作用。同時我們獲取所有95例大腸癌患者手

5、術后的切除標本,-80℃保存,用TIANamp Genomic DNA提取試劑盒提取大腸癌組織中的DNA,然后用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)分析技術檢測95例患者MTHFR基因G1793A的基因型,并分析MTHFR基因G1793A基因型與TopoⅡ表達之間的關系。
　　結果:
　　PCR-RFLP分析技術結果顯示:95例大腸癌患者中,70例(73.68％)為G/G基因型,25例(26.31%)為G/

6、A基因型,未看見A/A基因型。免疫組化結果顯示:在95例大腸癌患者中,TopoⅡ表達陽性的有55例,陽性表達率為57.90%(55/95);大腸癌中TopoⅡ的表達與患者性別、腫瘤大小、發(fā)病部位、分化程度、臨床分期及有無淋巴結轉移無關(P>0.05);但與年齡有關,年齡≥60歲的患者,其TopoⅡ的陽性表達率明顯高于年齡<60歲的患者(P<0.01)。其中,在70例MTHFR G1793A G/G基因型患者中,TopoⅡ表達陽性的有50

7、例,其陽性表達率為71.43%(50/70);在25例MTHFR G1793A G/A基因型患者中,TopoⅡ表達陽性的有7例,其陽性表達率為28.00%(7/25);所檢測的95例大腸癌患者中,MTHFR G1793A G/G基因型的患者TopoⅡ的陽性表達率(71.43%)顯著高于MTHFR G1793A G/A基因型患者的(28.00%)(χ2=4.22,P<0.05)。
　　結論:
　　1.大腸癌患者組織中TopoⅡ

8、的表達與患者性別、腫瘤大小、發(fā)病部位、分化程度、臨床分期及有無淋巴結轉移無關(P>0.05);但與年齡有關,年齡≥60歲的患者TopoⅡ的陽性表達率明顯高于年齡<60歲的患者(P<0.01)。
　　2. MTHFR G1793A G/G基因型與大腸癌組織中TopoⅡ的表達呈正相關,因此檢測大腸癌患者MTHFR G1793A的基因型可以預測該患者對化療的敏感程度。MTHFR G1793A G/G基因型患者可能對化療敏感,可能成為早期