DNMT3B基因多態(tài)性與大腸腺瘤、大腸癌的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、目的：大腸癌是常見(jiàn)惡性腫瘤之一，發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。大腸癌的發(fā)生是多基因參與、多步驟、多階段的復(fù)雜過(guò)程，存在有各種內(nèi)外因素交互作用導(dǎo)致的癌基因激活及抑癌基因失活等分子事件。DNA異常甲基化是人類惡性腫瘤發(fā)生的一種重要的表遺傳學(xué)機(jī)制，抑癌基因的失活與其啟動(dòng)子高甲基化有密切關(guān)系。DNA甲基化是由DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNA methyltransferases，DNMTs)催化完成的。高等真核生物中發(fā)現(xiàn)DNMTs有三種活性形式：DNMT1、D

2、NMT3A和DNMT3B，其中DNMT3B具有從頭甲基化(de novomethylation)活性，能使未甲基化的DNA發(fā)生甲基化。在惡性腫瘤中可觀察到，與DNMT1、DNMT3A相比較，DNMT3B呈明顯的過(guò)度表達(dá)，在腫瘤的發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮重要作用。本課題檢測(cè)了DNMT3B基因啟動(dòng)子區(qū)轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)39179G-T多態(tài)性，以探索其與中國(guó)河北漢族人群大腸腺瘤和大腸癌遺傳易感性的關(guān)系。 方法：采用基于人群的病例-對(duì)照研究方法，對(duì)473

3、例個(gè)體(大腸腺瘤患者146例，大腸腺癌170例，正常對(duì)照個(gè)體157例)進(jìn)行研究。所有標(biāo)本均取自內(nèi)鏡活檢的大腸粘膜組織，同時(shí)記錄吸煙飲酒狀態(tài)、家族史等信息。組織DNA的提取采用UNIQ-10柱式動(dòng)物基因組DNA抽提試劑盒提供的方法進(jìn)行，應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析(polymerase chain reaction-restriction fragment lengthpolymorphasm，PCR-RFLP)方法檢測(cè)DN

4、MT3B的基因型。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS13.0版軟件包(SPSS Company,Chicago，Illinois，USA)進(jìn)行，P＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)DNMT3B基因型在正常對(duì)照組中的分布情況進(jìn)行Hardy-Weinberg平衡分析(http：//www.kursus.kvl.dk/shares/vetgen/_Popgen/genetik/applets/kitest.htm)。病例組與對(duì)照組的基因型分布比較采用行×列

5、表卡方檢驗(yàn)。以非條件Logistic回歸法計(jì)算經(jīng)性別、年齡、吸煙、飲酒狀況和CRC家族史校正的相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)度的比值比(odds ratio，OR)及其95％可信區(qū)間(confidenceinterval，CI)。結(jié)果： 1.大腸腺瘤、腺癌患者中CRC家族史陽(yáng)性者比例(分別為9.6％和11.8％)顯著高于健康對(duì)照組(3.8％)(x2=4.08，P=0.04；x2=7.04，P=0.008)。大腸腺瘤、腺癌患者組的吸煙者比例(25.3％

6、和30.0％)與正常對(duì)照組(24.2％)相比較，無(wú)顯著性差異(x2=0.05，P=0.82；x21.38，P=0.24)。兩組飲酒者比例(10.3％和8.8％)與正常對(duì)照組(7.0％)相比較，亦無(wú)顯著性差異(x2=1.03，P=0.31；x2=0.37，P=0.54)。 2.DNMT3B多態(tài)性位點(diǎn)基因型分布在大腸腺瘤、腺癌和正常對(duì)照組中均符合Hardy-Weinberg平衡(P＞0.05)。DNMT3BG39179T多態(tài)在大腸腺

7、瘤、腺癌患者組和正常對(duì)照組中T/T、G/T+G/G基因型頻率分別為79.5％、20.5％，82.4％、17.6％和71.3％、28.7％。在大腸癌患者組中，攜帶G等位基因的基因型(G/T+G/G)頻率(17.6％)明顯低于正常對(duì)照組(28.7％)(P=0.01)。與T/T基因型相比，攜帶G等位基因的基因型(G/T+G/G)可降低總體大腸癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，經(jīng)性別、年齡、吸煙、飲酒狀況和有無(wú)CRC家族史多因素校正后的OR值為0.50(95％CI=

8、0.29～0.87)。而大腸腺瘤組與正常對(duì)照組比較，攜帶G等位基因的基因型(G/T+G/G)頻率(20.5％)比正常對(duì)照組(28.7％)也有減低趨勢(shì)，但無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，經(jīng)性別、年齡、吸煙、飲酒狀況和有無(wú)CRC家族史多因素校正后的OR值為0.63(95％CI=0.37～1.09)。 3 分層分析3.1根據(jù)性別進(jìn)行分層分析發(fā)現(xiàn)，與T/T基因型相比，攜帶G等位基因的基因型(G/T+G/G)可降低男性大腸癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，經(jīng)年齡、吸煙

9、、飲酒狀況和家族史校正后的OR值為0.35(95％CI=0.17～0.71)，但未發(fā)現(xiàn)與女性大腸癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，亦未發(fā)現(xiàn)DNMT3B多態(tài)與大腸腺瘤的易患性相關(guān)。 3.2根據(jù)年齡進(jìn)行分層分析發(fā)現(xiàn)，與T/T基因型相比，攜帶G等位基因的基因型(G/T G/G)可降低55歲以下個(gè)體大腸癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，經(jīng)性別、吸煙、飲酒狀況和家族史校正后的OR值為0.3 1(95％CI=0.12～0.84)，但未發(fā)現(xiàn)與老年人大腸癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，亦未發(fā)現(xiàn)DN

10、MT3B多態(tài)與大腸腺瘤的易患性相關(guān)。 3.3根據(jù)個(gè)體吸煙狀況進(jìn)行分層分析發(fā)現(xiàn)，與T/T基因型相比，攜帶G等位基因的基因型(G/T+G/G)可明顯降低吸煙個(gè)體大腸癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，經(jīng)性別、年齡、飲酒狀況和家族史校正后的OR值為0.24(95％CI=0.08～0.75)，未發(fā)現(xiàn)DNMT3B多態(tài)與大腸腺瘤的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。 3.4根據(jù)個(gè)體飲酒狀況進(jìn)行分層分析發(fā)現(xiàn)，與T/T基因型相比，攜帶G等位基因的基因型(G/T+G/G)可明顯降低

11、不飲酒個(gè)體大腸癌、大腸腺瘤的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，經(jīng)性別、年齡、吸煙狀況和家族史校正后的OR值分別為0.48(95％CI=0.27～0.84)和0.54(95％CI=0.31～0.96)。 3.5根據(jù)CRC家族史進(jìn)行分層分析發(fā)現(xiàn)，與T/T基因型相比，攜帶G等位基因的基因型(G/T+G/G)可明顯降低CRC家族史陰性個(gè)體大腸癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，經(jīng)性別、年齡、吸煙、飲酒狀況校正后的OR值為0.48(95％CI=0.27～0.85)，未發(fā)現(xiàn)DNMT3B多態(tài)與大

12、腸腺瘤的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。 結(jié)論： 1.大腸癌家族史可顯著增加大腸腺瘤、腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。 2.T/T純合型在河北漢族正常人群中為常見(jiàn)基因型。 3.攜帶G等位基因的基因型(G/T 與G/G)可降低總體大腸腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)大腸腺瘤的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)也有降低趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 4 DNMT3B基因多態(tài)性可能與55歲以下男性、吸煙、不飲酒、CRC家族史陰性個(gè)體大腸腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，即攜帶G等位基因可顯著降低上