還原型谷胱甘肽拮抗丁胺卡那霉素致豚鼠耳毒性實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景與目的：丁胺卡那霉素（Amikacin，AMK）是一種為臨床廣泛使用治療革蘭氏陰性桿菌感染的有效廣譜抗生素。由其造成的耳毒性亦日益嚴(yán)重，因此限制了它的臨床應(yīng)用。但目前其損害耳蝸和前庭功能的病理途徑尚不清楚，部分實(shí)驗(yàn)研究證明丁胺卡那霉素可以引起內(nèi)耳毛細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）的增加，活性氧可以與細(xì)胞膜上不飽和脂肪酸反應(yīng)，造成細(xì)胞膜損傷，胞溶性Ca2+積聚，導(dǎo)致DNA的斷裂，線粒體的損傷。本研究旨在以耳蝸發(fā)育近似人類的豚鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象[2]，

2、將還原型谷胱甘肽（GSH）作為一種生理性還原劑對(duì)等效人類治療劑量丁胺卡那霉素耳毒性的拮抗作用進(jìn)行觀察，為臨床合理應(yīng)用此類藥物提供參考。 方法：健康雜色豚鼠56只，體重450～500g，編號(hào)后隨機(jī)分為四組，（1）對(duì)照組：每日肌肉注射生理鹽水（0.8ml/kg），共10d后，停藥觀察14d；（2）丁胺卡那霉素（AMK）組：每日肌肉注射丁胺卡那霉素80mg/kg，共10d后，停藥觀察14d；（3）還原型谷胱甘肽（GSH）組：每日腹部皮

3、下注射還原型谷胱甘肽300mg/kg，共10d后，停藥觀察14d；（4）AMK+GSH組：每日肌注丁胺卡那霉素80 mg/kg，5 min后腹部皮下注射還原型谷胱甘肽300 mg/kg，共10d后，停藥觀察14d；各組動(dòng)物在觀察期結(jié)束后，檢測(cè)耳蝸組織的活性氧（ROS）水平及谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物岐化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）活力；采用耳蝸基底膜鋪片的方法，對(duì)深染的外毛細(xì)胞表皮板進(jìn)行計(jì)數(shù)；透射電鏡觀察外毛細(xì)胞

4、細(xì)胞器的變化。 結(jié)果： （1）各組豚鼠的ROS水平，GSH-Px、SOD、CAT活力比較ROS水平：丁胺卡那霉素（AMK）組（297.5±3.8 U/（mg.prot））高于對(duì)照組（240.4±4.0 U/（mg. prot）），有非常顯著性差異（P<0.01）；還原型谷胱甘肽（GSH）組（242.3±4.2U/（mg.prot）），與對(duì)照組比較，無(wú)顯著性差異（P>0.05）；AMK+GSH組（246.1±9.1U/（m

5、g. prot））與對(duì)照組比較，無(wú)顯著性差異（P>0.05）；但AMK+GSH組（246.1±9.1U/（mg.prot））低于丁胺卡那霉素（AMK）組（297.5±3.8 U/（mg. prot）），有非常顯著性差異（P<0.01）。GSH-Px、SOD、CAT活力：AMK組（198.2±5.1 U/（mg. prot）、28.1±2.5U/（mg. prot）、15.1±1.7 U/（mg. prot））均低于對(duì)照組（230.9±4

6、.9U/（mg. prot）、43.7±2.6 U/（mg. prot）、20.4±1.4 U/（mg. prot）），均有非常顯著性差異（P<0.01）；GSH組（224.8±8.6U/（mg. prot）、41.2±4.0 U/（mg. prot）、19.8±2.1 U/（mg. prot））與對(duì)照組比較，均無(wú)顯著性差異（P>0.05）；AMK+GSH組（224.4±9.7 U/（mg. prot）、39.8±8.8 U/（mg.

7、prot）、18.8±2.3 U/（mg. prot））與對(duì)照組比較，均無(wú)顯著性差異（P>0.05）；但AMK+GSH組（224.4±9.7 U/（mg. prot）、39.8±8.8 U/（mg. prot）、18.8±2.3 U/（mg. prot））均高于丁胺卡那霉素（AMK）組（198.2±5.1 U/（mg. prot）、28.1±2.5 U/（mg. prot）、15.1±1.7 U/（mg.prot）），均有非常顯著性差異

8、（P<0.01）。 （2）耳蝸形態(tài)學(xué)觀察光鏡下：對(duì)照組耳蝸三排外毛細(xì)胞排列有序，丁胺卡那霉素（AMK）組外毛細(xì)胞纖毛散亂、倒伏，深染的表皮板數(shù)明顯增加，AMK組深染的表皮板數(shù)（第一回：20.1±9.5個(gè)，第二回：14.5±9.7個(gè)）與對(duì)照組（第一回：1.9±0.6個(gè)，第二回：1.7±1.2個(gè)）比較明顯增加，均有非常顯著性差異（P<0.01），AMK+GSH組深染的表皮板數(shù)（第一回：5.6±2.0個(gè)，第二回：4.5±1.8個(gè)）較丁

9、胺卡那霉素（AMK）組（第一回：20.1±9.5個(gè)，第二回：14.5±9.7個(gè)）明顯減少，均有非常顯著性差異（P<0.01），GSH組深染的表皮板數(shù)（第一回：1.7±1.1個(gè)，第二回：1.4±1.0個(gè)）與對(duì)照組（第一回：1.9±0.6個(gè)，第二回：1.7±1.2個(gè)）比較，均無(wú)顯著性差異（P>0.05）。電鏡下：丁胺卡那霉素（AMK）組核固縮，線粒體數(shù)量減少或大多數(shù)線粒體空泡變性；GSH組和對(duì)照組細(xì)胞結(jié)構(gòu)基本正常；AMK+GSH組線粒體染色