還原型谷胱甘肽拮抗丁胺卡那霉素致豚鼠耳毒性實驗研究.pdf

1、背景與目的：丁胺卡那霉素（Amikacin，AMK）是一種為臨床廣泛使用治療革蘭氏陰性桿菌感染的有效廣譜抗生素。由其造成的耳毒性亦日益嚴(yán)重，因此限制了它的臨床應(yīng)用。但目前其損害耳蝸和前庭功能的病理途徑尚不清楚，部分實驗研究證明丁胺卡那霉素可以引起內(nèi)耳毛細胞內(nèi)活性氧（ROS）的增加，活性氧可以與細胞膜上不飽和脂肪酸反應(yīng)，造成細胞膜損傷，胞溶性Ca2+積聚，導(dǎo)致DNA的斷裂，線粒體的損傷。本研究旨在以耳蝸發(fā)育近似人類的豚鼠為實驗對象[2]，

2、將還原型谷胱甘肽（GSH）作為一種生理性還原劑對等效人類治療劑量丁胺卡那霉素耳毒性的拮抗作用進行觀察，為臨床合理應(yīng)用此類藥物提供參考。 方法：健康雜色豚鼠56只，體重450～500g，編號后隨機分為四組，（1）對照組：每日肌肉注射生理鹽水（0.8ml/kg），共10d后，停藥觀察14d；（2）丁胺卡那霉素（AMK）組：每日肌肉注射丁胺卡那霉素80mg/kg，共10d后，停藥觀察14d；（3）還原型谷胱甘肽（GSH）組：每日腹部皮

3、下注射還原型谷胱甘肽300mg/kg，共10d后，停藥觀察14d；（4）AMK+GSH組：每日肌注丁胺卡那霉素80 mg/kg，5 min后腹部皮下注射還原型谷胱甘肽300 mg/kg，共10d后，停藥觀察14d；各組動物在觀察期結(jié)束后，檢測耳蝸組織的活性氧（ROS）水平及谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物岐化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）活力；采用耳蝸基底膜鋪片的方法，對深染的外毛細胞表皮板進行計數(shù)；透射電鏡觀察外毛細胞

4、細胞器的變化。 結(jié)果： （1）各組豚鼠的ROS水平，GSH-Px、SOD、CAT活力比較ROS水平：丁胺卡那霉素（AMK）組（297.5±3.8 U/（mg.prot））高于對照組（240.4±4.0 U/（mg. prot）），有非常顯著性差異（P<0.01）；還原型谷胱甘肽（GSH）組（242.3±4.2U/（mg.prot）），與對照組比較，無顯著性差異（P>0.05）；AMK+GSH組（246.1±9.1U/（m

5、g. prot））與對照組比較，無顯著性差異（P>0.05）；但AMK+GSH組（246.1±9.1U/（mg.prot））低于丁胺卡那霉素（AMK）組（297.5±3.8 U/（mg. prot）），有非常顯著性差異（P<0.01）。GSH-Px、SOD、CAT活力：AMK組（198.2±5.1 U/（mg. prot）、28.1±2.5U/（mg. prot）、15.1±1.7 U/（mg. prot））均低于對照組（230.9±4

6、.9U/（mg. prot）、43.7±2.6 U/（mg. prot）、20.4±1.4 U/（mg. prot）），均有非常顯著性差異（P<0.01）；GSH組（224.8±8.6U/（mg. prot）、41.2±4.0 U/（mg. prot）、19.8±2.1 U/（mg. prot））與對照組比較，均無顯著性差異（P>0.05）；AMK+GSH組（224.4±9.7 U/（mg. prot）、39.8±8.8 U/（mg.

7、prot）、18.8±2.3 U/（mg. prot））與對照組比較，均無顯著性差異（P>0.05）；但AMK+GSH組（224.4±9.7 U/（mg. prot）、39.8±8.8 U/（mg. prot）、18.8±2.3 U/（mg. prot））均高于丁胺卡那霉素（AMK）組（198.2±5.1 U/（mg. prot）、28.1±2.5 U/（mg. prot）、15.1±1.7 U/（mg.prot）），均有非常顯著性差異

8、（P<0.01）。 （2）耳蝸形態(tài)學(xué)觀察光鏡下：對照組耳蝸三排外毛細胞排列有序，丁胺卡那霉素（AMK）組外毛細胞纖毛散亂、倒伏，深染的表皮板數(shù)明顯增加，AMK組深染的表皮板數(shù)（第一回：20.1±9.5個，第二回：14.5±9.7個）與對照組（第一回：1.9±0.6個，第二回：1.7±1.2個）比較明顯增加，均有非常顯著性差異（P<0.01），AMK+GSH組深染的表皮板數(shù)（第一回：5.6±2.0個，第二回：4.5±1.8個）較丁

9、胺卡那霉素（AMK）組（第一回：20.1±9.5個，第二回：14.5±9.7個）明顯減少，均有非常顯著性差異（P<0.01），GSH組深染的表皮板數(shù)（第一回：1.7±1.1個，第二回：1.4±1.0個）與對照組（第一回：1.9±0.6個，第二回：1.7±1.2個）比較，均無顯著性差異（P>0.05）。電鏡下：丁胺卡那霉素（AMK）組核固縮，線粒體數(shù)量減少或大多數(shù)線粒體空泡變性；GSH組和對照組細胞結(jié)構(gòu)基本正常；AMK+GSH組線粒體染色