甘露糖結(jié)合凝集素與Dectin-1、TLR2在真菌性角膜炎中的相互作用.pdf

1、目的：探討甘露糖結(jié)合凝集素（mannose binding lectin，MBL）在煙曲霉菌感染的人角膜上皮細(xì)胞中的作用，及其與Dectin-1、TLR2的相互作用。
　　方法：以體外培養(yǎng)的正常人永生化角膜上皮細(xì)胞為對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組為煙曲霉菌菌絲抗原、重組人MBL（recombination human MBL，rhMBL）、MBL抗體、昆布多糖及TLR2抗體刺激的人永生化角膜上皮細(xì)胞，在4,8,12h時(shí)間點(diǎn)用Western blo

2、t法檢測(cè)MBL蛋白表達(dá)，在0.5，1，2，4h用real-time PCR法檢測(cè)MBL mRNA,在8h時(shí)間點(diǎn)real-time PCR法檢測(cè)Dectin-1、TLR2、IL-1β及TNF-αmRNA,在24h時(shí)間點(diǎn)用Western blot法檢測(cè)Dectin-1、TLR2蛋白表達(dá)，在24h時(shí)間點(diǎn)用Elisa法檢測(cè)IL-1β、TNF-α蛋白表達(dá)變化。
　　結(jié)果：煙曲霉菌菌絲抗原刺激后可引起MBL基因及蛋白水平表達(dá)量相對(duì)增高，基因水

3、平表達(dá)呈時(shí)間依賴性，1h時(shí)達(dá)到峰值。rhMBL可促進(jìn)下游細(xì)胞因子 IL-1β、TNF-α的基因及蛋白水平表達(dá)，并呈劑量依賴性，10ug/ml rhMBL增強(qiáng)作用最強(qiáng)，抑制MBL可減少IL-1β、TNF-α的基因及蛋白水平表達(dá)。rhMBL能增強(qiáng)煙曲霉菌菌絲刺激引起的 Dectin-1、TLR2的產(chǎn)生，呈劑量依賴，10ug/ml為最佳刺激濃度，抑制MBL能明顯下調(diào)Dectin-1、TLR2表達(dá)。分別以昆布多糖及TLR2抗體抑制Dectin-

4、1、TLR2，MBL表達(dá)均較單純真菌刺激組降低。其表達(dá)變化差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：MBL存在于正常角膜上皮細(xì)胞中，煙曲霉菌菌絲刺激引起其表達(dá)升高。MBL參與了人角膜上皮細(xì)胞對(duì)煙曲霉菌菌絲抗原的識(shí)別，介導(dǎo)下游炎癥因子釋放，在人角膜上皮細(xì)胞固有免疫早期階段發(fā)揮作用。MBL可增強(qiáng)真菌性角膜炎中模式識(shí)別受體 Dectin-1、TLR2的表達(dá)，間接促進(jìn)機(jī)體抗感染作用； MBL與Dectin-1、TLR2在人角膜上皮細(xì)胞抗真菌感染中發(fā)