甘露糖結(jié)合凝集素在系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病機制中的作用.pdf

1、目的1.檢測系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者和健康獻血員甘露糖結(jié)合凝集素(MBL)的血清水平。 2.建立用熒光雜交探針實時PCR快速檢測人MBL基因外顯子1區(qū)第52、54和57位密碼子突變和啟動子區(qū)-550(H/L)位點基因多態(tài)性的方法。 3.用上述方法檢測SLE患者和健康獻血員MBL外顯子1區(qū)的基因突變和啟動子區(qū)H/L的基因多態(tài)性。 4.分析我國SLE患者的MBL血清水平及其基因變異與SLE臨床表現(xiàn)及其病情活動性指

2、數(shù)的關(guān)系，初步探討MBL在SLE發(fā)病機制中的作用。 方法入組40例SLE患者和30名健康獻血員。通過酶聯(lián)免疫試驗(ELISA)檢測MBL的血清水平。采集外周EDTA抗凝血提取基因組DNA，根據(jù)MBL2*LXPA(GenBankX15422)單倍體序列設(shè)計了外顯子1區(qū)和啟動子區(qū)的引物和熒光標(biāo)記的特異性寡核苷酸雜交探針，通過LightCycler實時PCR儀結(jié)合熒光標(biāo)記的特異性寡核苷酸探針，檢測2組標(biāo)本的MBL外顯子1區(qū)的基因突變和

3、啟動子區(qū)H/L的基因多態(tài)性。 結(jié)果1.血清學(xué)結(jié)果：SLE患者的MBL血清水平顯著低于健康獻血員(107.2對290.2，P=0.0002)。 2.分子生物學(xué)結(jié)果：①在國內(nèi)首次成功地建立了用熒光雜交探針實時PCR快速檢測人MBL基因變異的方法，該方法快速，結(jié)果可靠，重復(fù)性好。②用上述方法檢測，中國人MBL基因外顯子1區(qū)的突變以第54位密碼子的突變?yōu)橹?，其突變頻率在SLE患者為37.1％，顯著高于對照組的13.3％(P=0.

4、049)。③SLE患者和健康獻血員在MBL基因啟動子區(qū)7均存在H/L多態(tài)性，其中L的頻率在SLE患者為67.5％，與對照組的53.3％相當(dāng)(P＞0.05)。 3.血清學(xué)結(jié)果與SLE患者臨床的關(guān)系：①在SLE患者中低MBL組(＜100ng/m1)白細(xì)胞減少的比例較正常MBL組(≥100ng/m1)明顯增高(50％對18.8％，P=0.046)。②低MBL組SLEDAI平均積分顯著增高(11.67對6.19，P=0.0023)，而且

5、其SLEDAI積分≥10的比例也顯著高于正常MBL組(66.7％對18.8％，P=0.003)。③SLEDAI積分與MBL血清水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.48，P＜0.001)。 4.分子生物學(xué)結(jié)果與SLE患者臨床的關(guān)系：①發(fā)生MBL基因第54位密碼子突變的SLE患者補體水平下降的發(fā)生率較未發(fā)生突變者顯著增高(100.0％對72.0％，P=0.026)，其SLEDAI積分也顯著增高(12.87對7.44，P=0.0029)；②啟動子

6、區(qū)H/L多態(tài)性與各臨床表現(xiàn)及SLEDAI積分均無相關(guān)性。 5.血清學(xué)結(jié)果與分子生物學(xué)結(jié)果的關(guān)系：發(fā)生第54位密碼子突變的SLE患者血清MBL水平顯著下降(141.7ng/ml對49.8ng/ml，P=0.00027)；表現(xiàn)型為L的SLE患者其MBL血清水平比表現(xiàn)型為H的患者低，但未達到統(tǒng)計學(xué)的顯著意義(P=0.102)。 結(jié)論根據(jù)上述MBL血清水平及其基因變異的結(jié)果得出以下初步結(jié)論：1.低水平的血清MBL增加了SLE發(fā)病