稻瘟病菌中硝酸鹽利用缺陷型突變體的篩選及相關(guān)基因的研究.pdf

1、稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)既是經(jīng)濟(jì)重要的病原真菌，也是研究植物與微生物相互作用的重要模式生物，從全基因組水平分析研究該菌關(guān)鍵基因的功能，可以加速對(duì)稻瘟病菌生物學(xué)及其致病分子機(jī)制的認(rèn)識(shí)，為培育持久抗病水稻品種和制定稻瘟病菌持續(xù)管理的策略提供理論依據(jù)。為此，本研究從450個(gè)農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化T-DNA的突變體中篩選硝酸鹽利用缺陷型突變體，共篩選到6個(gè)硝酸鹽利用缺陷型突變體，對(duì)其中之一T940002002-1.2(5)進(jìn)行如

2、下的研究： TAIL-PCR擴(kuò)增得到T-DNA插入側(cè)翼稻瘟病菌基因組序列。一Guy11和T940002002-1-2(5)突變體進(jìn)行有性交配，得到的37個(gè)子囊孢子后代，潮霉素的分離比例符合1-1的分離比例，說明可能為單拷貝插入。 分析側(cè)翼序列，ToDNA插在推測(cè)基因MGG_06042.5啟動(dòng)起始位點(diǎn)ATG上游318bp位置中，推測(cè)影響的基因?yàn)镸GG_06042.5。 T940002002-1-2(5)、T9400

3、00302突變體對(duì)C101LACPi-1(t)、C101PKTPi-4a的致病性增強(qiáng)，推測(cè)插入的基因可能同時(shí)也與稻瘟病菌致病性有關(guān)。 將29個(gè)子囊孢子培養(yǎng)產(chǎn)生的分生孢子接種C101LACPi-1(t)、C101PKTPi-4a，由于親本Guy11和T940002002-1-2(5)對(duì)兩個(gè)水稻品種均為致病的，接種結(jié)果顯示后代也均致病的，說明T-DNA插入的基因可能與無(wú)毒基因的表達(dá)有關(guān)，也進(jìn)一步證明對(duì)C101LACPi-1(t)、