農(nóng)桿菌介導(dǎo)的稻瘟病菌轉(zhuǎn)化及致病突變體的篩選.pdf

1、稻瘟病菌可以引起水稻上的重要病害-稻瘟病。了解M.grisea的致病分子機(jī)理不僅對(duì)防治稻瘟病具有重要的意義，而且它作為一個(gè)理想的研究體系對(duì)了解其他植物病原真菌與寄主的相互作用也有重要的意義。分離和鑒定稻瘟病菌的致病相關(guān)基因，是達(dá)到這一目標(biāo)的關(guān)鍵所在。DNA插入突變是標(biāo)記、分離功能基因的有效途徑之一，ATMT是絲狀真菌遺傳轉(zhuǎn)化的一個(gè)的新的技術(shù)，具有轉(zhuǎn)化效率高、成本低，操作方便和重復(fù)性好多重優(yōu)點(diǎn)。 用含有潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶基因雙元載

2、體的農(nóng)桿菌介導(dǎo)稻瘟病菌(Guyll)轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化效率達(dá)每106個(gè)分生孢子＞300個(gè)轉(zhuǎn)化子，并得到了1114個(gè)轉(zhuǎn)化子。通過(guò)繼代培養(yǎng)和PCR檢測(cè)，證明插入到稻瘟病菌基因組中的潮霉素抗性基因可穩(wěn)定遺傳。用感病大麥葉片離體接種的方法快速測(cè)定稻瘟病菌轉(zhuǎn)化子的致病性，鑒定了致病性下降或缺陷的4個(gè)突變體，它們分別是A1-134，A1-452，A2-1-8和A1-3-6。進(jìn)一步的表型分析發(fā)現(xiàn)：1)這些突變體對(duì)感病水稻品種的致病性也有不同程度的下降；2)A

3、1-134突變體的產(chǎn)孢量顯著下降，僅為野生菌株的7.8％,孢子形態(tài)為圓球形，只有一個(gè)分隔，而A1-452突變體產(chǎn)孢量明顯增多，是野生菌株的20多倍；3)A2-1-8孢子為長(zhǎng)形，在正常的疏水表面不形成附著胞；4)A1-3-6分生孢子為長(zhǎng)形，基本沒(méi)有沒(méi)有致病性。 用TAIL-PCR的方法獲得了A1-134突變體的T-DNA左翼基因組序列，經(jīng)測(cè)序和BLAS分析，外源T-DNA插入位點(diǎn)位于Ⅱ號(hào)染色體的MGG_06868.5基因終止密碼子