江淮地區(qū)間日瘧原蟲乳酸脫氫酶基因多態(tài)性研究.pdf

1、目的:分析江淮地區(qū)間日瘧原蟲乳酸脫氫酶基因(Plasmodium vivax lactate dehydrogenase.PvLDH)序列特征,以及是否存在多態(tài)性,研究其作為靶抗原在瘧疾診斷和新藥篩選中的意義及應(yīng)用前景。
　　方法:1、在安徽省蚌埠市區(qū)、五河縣、利辛縣等地采集間日瘧患者末梢血,制備厚薄血片及干血濾紙片。用QIAampDNAminikit(QIAGEN,德國)試劑盒提取干血濾紙片間日瘧原蟲基因組DNA(gDNA)39

2、份,所有樣本經(jīng)染色鏡檢和PCR檢測(cè)鑒定均為單純間日瘧原蟲。2、根據(jù)GenBank數(shù)據(jù)庫中間日瘧原蟲Belem株LDH基因序列(NCBINo:DQ060151)設(shè)計(jì)引物,以提取的間日瘧原蟲基因組DNA為模板,PCR擴(kuò)增LDH基因,產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳純化回收后連接至pGEM-T質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化E.coliDH5α菌株后挑取菌落進(jìn)行PCR鑒定,將初步篩選的陽性克隆進(jìn)行測(cè)序,最后通過Blast等方法進(jìn)行序列的比對(duì)分析。
　　結(jié)果:39份患者血

3、樣經(jīng)病原學(xué)染色鏡檢和PCR檢測(cè)均為單純間日瘧原蟲感染,未發(fā)現(xiàn)惡性瘧原蟲等其他瘧原蟲的單純或合并感染。擴(kuò)增的PvLDH編碼基因克隆至T載體后測(cè)序顯示目的片段大小均為951bp,且39份樣本PvLDH核苷酸序列均無差異。通過BLAST方法對(duì)克隆的PvLDH基因序列進(jìn)行比對(duì)分析,發(fā)現(xiàn)江淮地區(qū)間日瘧原蟲與Sal-I株、Belem株、薩爾瓦多株、EJEU60134株、MIMO612514株、ASAO6G29643株、ASAO6R09632株、MI

4、AO61042株的LDH基因同源性高達(dá)99.7％-99.9%,只有1-3個(gè)堿基的差別;對(duì)PvLDH的氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)江淮地區(qū)間日瘧原蟲與Sal-I株、Belem株等株間日瘧原蟲的LDH蛋白序列同源性為100%,與EJEU60134株、MIAO61251株的同源性為為99.7%,僅有1個(gè)氨基酸的差異。
　　結(jié)論:江淮地區(qū)間日瘧原蟲乳酸脫氫酶基因序列具有高度保守性,與Sal-I株、Belem株等基因序列比對(duì)分析LDH基