中緬邊境間日瘧原蟲CSP基因分型.pdf

1、目的:對(duì)中緬邊境間日瘧原蟲進(jìn)行分子流行病學(xué)調(diào)查，揭示其分布特征、流行規(guī)律等；為后續(xù)研究間日瘧原蟲復(fù)發(fā)特征、基因型與耐藥關(guān)系打下基礎(chǔ)。 方法:（1）收集06—08年云南騰沖及緬甸拉咱的間日瘧原蟲病例，經(jīng)鏡檢確認(rèn)，采集濾紙血樣標(biāo)本。（2）用Chelex—100離子交換法提取血樣中的間日瘧原蟲基因組DNA。（3）設(shè)計(jì)合成一組間日瘧原蟲環(huán)子孢子蛋白（CSP）基因特異分型引物。（4）巢式PCR擴(kuò)增。（5）凝膠電泳，根據(jù)特異性引物所擴(kuò)增的P

2、CR片斷的有無(wú)判斷結(jié)果。（6）PCR擴(kuò)增間日瘧原蟲種特異片斷，自動(dòng)測(cè)序儀測(cè)序驗(yàn)證，分析其結(jié)構(gòu)特征。（7）進(jìn)化樹分析。（8）收集間日瘧原蟲感染的病例數(shù)據(jù)，綜合分析，對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。 意義不同地理株的瘧原蟲，其生物學(xué)特性、對(duì)媒介按蚊的感染力、對(duì)人類宿主的免疫原性及對(duì)抗瘧藥的敏感性存在明顯差異，這在一定程度上影響了瘧疾的發(fā)病率和治愈率。通過(guò)基因分型可掌握瘧原蟲蟲株的遺傳學(xué)特征，提高瘧疾的診斷水平，同時(shí)能夠根據(jù)瘧原蟲不同地理株基因分

3、型和分布情況，迅速確定疾病的來(lái)源及判斷傳播趨勢(shì)，為防治工作提供科學(xué)依據(jù)。 結(jié)果:（1）在所檢出的147份間日瘧原蟲樣本中，熱帶族為70例，占總數(shù)的47.62%，溫帶族為65例，占總數(shù)的44.22%，混合感染為13例，占總數(shù)的8.16%，PV—Ⅱ型蟲株未檢出。（2）147份間日瘧樣本中，112例為云南騰沖樣本，35例為緬甸拉咱標(biāo)本，測(cè)序法顯示緬甸拉咱與云南騰沖間日瘧CSP基因型構(gòu)成有明顯差異，緬甸拉咱以溫帶族為優(yōu)勢(shì)蟲株（占65.7

4、1%），云南騰沖以熱帶族為優(yōu)勢(shì)蟲株（53.57%）。 結(jié)論:（1）緬甸拉咱與云南騰沖間日瘧CSP基因型構(gòu)成有明顯差異，云南騰沖以熱帶族為優(yōu)勢(shì)蟲株。（2）測(cè)序法發(fā)現(xiàn)云南間日瘧原蟲CSP基因高度變異。PV—Ⅰ型中央九肽（GDRADGQPA）重復(fù)單位發(fā)現(xiàn)多種突變，但仍以第五位氨基的A/D突變?yōu)橹?。溫帶族重?fù)區(qū)后的十二肽（GGNAANKKAEDA）插入序列也發(fā)現(xiàn)突變，提示針對(duì)此插入序列設(shè)計(jì)的溫帶族特異分型引物存在一定局限性。（3）進(jìn)化樹