惡性瘧原蟲(chóng)谷氨酸脫氫酶基因的克隆、表達(dá)及產(chǎn)物抗原活性究.pdf

1、該研究利用PCR技術(shù)釣取了惡性瘧原蟲(chóng)海南株(FCC1/HN)谷氨酸脫氫酶編碼基因,克隆入pGEX-4T-1表達(dá)載體,測(cè)定的序列與惡性瘧原蟲(chóng)Thailand株GDH基因序列進(jìn)行比較,其推導(dǎo)的氨基酸序列與不同物種的GDH序列進(jìn)行同源性分析,以探討惡性瘧原蟲(chóng)谷氨酸脫氫酶(GDHpf)獨(dú)特的理化、生物學(xué)及酶學(xué)特性的分子機(jī)制.并在大腸桿菌BL21中進(jìn)行了誘導(dǎo)表達(dá),純化重組蛋白免疫小鼠制備多克隆抗體,運(yùn)用ELISA、Western-blot進(jìn)行抗原

2、性分析,為下一步篩選單抗用于GDH免疫膠體金診斷試劑(GICA)盒的研制奠定基礎(chǔ).結(jié)果顯示,利用PCR技術(shù)成功地釣取了編碼中國(guó)惡性瘧原蟲(chóng)海南株(FCC1/HN)谷氨酸脫氫酶的基因序列.將GDHpf基因克隆到pGEX-4T-1表達(dá)質(zhì)粒,經(jīng)PCR、限制性酶切分析等鑒定,構(gòu)建了pGEX-GDH重組表達(dá)質(zhì)粒,首次測(cè)定了編碼中國(guó)惡性瘧原蟲(chóng)海南株(FCC1/HN)谷氨酸脫氫酶編碼基因的全序列,大小為1413bp,無(wú)內(nèi)含子.惡性瘧原蟲(chóng)海南株GDH基因

3、與Thailand株GDH基因相比,兩者同源性高達(dá)99.86﹪,僅存在2個(gè)點(diǎn)突變,且均為同義突變,兩者推導(dǎo)的氨基酸序列完全相同,說(shuō)明該基因在不同的惡性瘧原蟲(chóng)株之間高度保守.同源性分析結(jié)果表明,惡性瘧原蟲(chóng)海南株GDH氨基酸序列與人的GDH同工酶、藍(lán)氏賈第鞭毛蟲(chóng)、克魯氏錐蟲(chóng)和細(xì)菌GDH相比,同源性較低,即使與BLAST檢索出的具有最高同源性的藍(lán)氏賈第鞭毛蟲(chóng)相比,也僅有57.90﹪的氨基酸殘基相同,因此,瘧原蟲(chóng)GDH明顯不同于其它生物GDH.