PDCD5蛋白在人類前列腺癌組織中的表達(dá)及其與雄激素受體表達(dá)的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景： 目前在美國前列腺癌（PCa）的發(fā)病率已經(jīng)超過肺癌，成為第一位危害男性健康的腫瘤。我國仍屬于PCa的低危國家，但由于經(jīng)濟(jì)發(fā)展帶來的飲食結(jié)構(gòu)西方化、預(yù)期壽命延長等暴露因素的改變，近年來國內(nèi)部分發(fā)達(dá)地區(qū)的PCa發(fā)病率迅速升高。 研究結(jié)果顯示，關(guān)于細(xì)胞凋亡在PCa演變過程中的作用目前尚難定論，PCa細(xì)胞凋亡的局部調(diào)控機(jī)制可能遠(yuǎn)較我們的預(yù)期要更為復(fù)雜。盡管具體效應(yīng)總說紛紜，但細(xì)胞凋亡與PCa的發(fā)生、發(fā)展以及治療效應(yīng)的產(chǎn)

2、生均有密切關(guān)系，在基因及其產(chǎn)物等不同水平闡明凋亡調(diào)控因子在PCa組織中的表達(dá)及其意義有助于PCa診療水平的不斷提高。 PDCD5(programmedcelldeath5)是北京大學(xué)人類疾病基因中心1999年在國際上首先報道的一個凋亡誘導(dǎo)基因。體外實(shí)驗表明，PDCD5在宮頸癌、卵巢癌、肝癌等多種腫瘤細(xì)胞系中均可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡，并對放、化療起協(xié)同作用。近年來，我們在國內(nèi)外最先將PDCD5引入泌尿生殖系腫瘤發(fā)病機(jī)制的研究。應(yīng)用

3、免疫組化的方法首次檢測了癌旁正常腎組織及腎透明細(xì)胞癌組織中PDCD5的表達(dá)，結(jié)果顯示PDCD5在腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)表達(dá)較強(qiáng)，而在腎透明細(xì)胞癌組織中的表達(dá)則明顯降低，并且隨著腎腫瘤分期的上升以及惡性程度的增加，PDCD5的表達(dá)呈下降的趨勢，說明PDCD5可能在不同程度上參與了腎癌發(fā)生、發(fā)展過程中的細(xì)胞凋亡調(diào)控。目前，對PDCD5的研究多局限于實(shí)驗室階段，迄今為止尚無在臨床階段對PDCD5在正常前列腺、BPH及PCa組織中的表達(dá)情況進(jìn)行研究的

4、報道。 目的： 通過免疫組化方法探究PDCD5在正常前列腺、BPH及PCa組織中的表達(dá)特點(diǎn)，并對AR與PDCD5在PCa組織中表達(dá)的相關(guān)性進(jìn)行研究，進(jìn)而求證PDCD5通過調(diào)控細(xì)胞凋亡參與PCa發(fā)生、發(fā)展進(jìn)程的可能性，以期篩選具有較好臨床實(shí)用價值的PCa預(yù)后評估指標(biāo)，并為在基因水平上進(jìn)行PCa的防治尋找新的有效靶點(diǎn)。 材料與方法： PCa組織標(biāo)本22例均來源于近期在我院及外院行前列腺癌根治術(shù)患者，切片行病理

5、證實(shí)后，參照Gleason分級標(biāo)準(zhǔn)，低危組11例(Gleason評分≤6)，中危組3例(Gleason評分=7)，高危組8例(Gleason評分≥8)。有6例外院標(biāo)本臨床資料欠缺，其余16例年齡58-71歲，平均65.1歲；血清PSA22.5ng／ml～276.8ng／ml，平均67.6ng／ml；按照臨床分期，T1c期5例、T2a期3例、T2b期4例、T2c期3例、T3b期1例。所有患者術(shù)前均未接受放療、化療及內(nèi)分泌治療。BPH組織標(biāo)

6、本22例，取材于2007年1月至2007年9月在我院接受TURP或恥骨上前列腺摘除術(shù)的部分BPH患者，年齡61-78歲，平均69.7歲。12例正常前列腺組織標(biāo)本取材于非泌尿系疾病致死行尸檢者，年齡21-36歲，平均28.3歲。 首先，采用EnVision法對正常前列腺、BPH及不同病理分級的PCa組織切片進(jìn)行PDCD5的免疫組化染色，用已知宮頸上皮細(xì)胞切片作陽性對照，PBS代替一抗作陰性對照，采用人工閱片評分及計算機(jī)輔助染色強(qiáng)度

7、判定2種方法對PDCD5在相應(yīng)組織中的表達(dá)進(jìn)行定性及定量分析。 隨后，仍然應(yīng)用EnVision法對22例PCa組織的AR表達(dá)進(jìn)行檢測，用已知陽性的BPH切片作AR陽性對照，PBS代替一抗作陰性對照。根據(jù)定性分析結(jié)果PCa組分為AR(+)及AR(-)兩個亞組，對PDCD5在AR(+)／(-)兩組PCa標(biāo)本間表達(dá)的差異性進(jìn)行比較。 所有統(tǒng)計學(xué)分析過程均采用SPSS10.O統(tǒng)計軟件實(shí)現(xiàn)，以P<0.05表示差異具有顯著性。正常前

8、列腺、BPH及不同病理分級PCa組織PDCD5表達(dá)的比較采用多個獨(dú)立樣本比較的秩和檢驗(KruskalwallisTest)、PCa組織中AR與PDCD5表達(dá)的相關(guān)性分析采用兩獨(dú)立樣本比較的秩和檢驗(Mann-whitneyTest)、AR在不同病理分級PCa組織中表達(dá)的比較采用配對計數(shù)資料的x2檢驗及一致性檢驗進(jìn)行分析(McNemartestandMeasureofAgreementKappa)，對于理論頻數(shù)較小者取校正后p值；正常前

9、列腺、BPH及不同病理分級PCa組織PDCD5染色平均光密度值(mOD)的比較采用單向方差分析(One-WayANOVA)，進(jìn)一步的組間比較采用LSD法：PCa組織中AR表達(dá)與PDCD5的平均光密度值分析采用獨(dú)立樣本t檢驗(Independent-SampleTTest)。 結(jié)果： 1.PDCD5在正常前列腺、BPH及PCa組織的表達(dá) PDCD5蛋白主要在PCa組織的腺上皮呈胞漿著色，也可部分著色子細(xì)胞核。由于中

10、危組(Glesaon評分=7)Pca僅有3例，因此將其與低危組(Glesaon評分≤6)Pca合并為中低危組(Glesaon評分≤7)Pca，與高危組(Glesaon評分>7)Pca、正常前列腺組及BPH組進(jìn)行比較。統(tǒng)計學(xué)分析表明，正常前列腺與BPH組織中PDCD5表達(dá)無顯著性差異(p=1.000)。中低危組及高危組Pca組織中PDCD5表達(dá)與正常前列腺與BPH均存在顯著性差異(中低危組vs正常前列腺，p=0.001；中低危組vsBPH

11、，p=0.001；高危組vs正常前列腺，p=0.000；高危組vsBPH，p=0.000)，并且兩組間PDCD5表達(dá)亦存在顯著性差異(p=0.019)。 統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果提示PDCD5在PCa組織中的表達(dá)較正常組織及BPH均有顯著下降，隨著PCa惡性程度上升，PDCD5的表達(dá)進(jìn)一步下調(diào)。 2.PDCD5在正常前列腺、BPH及PCa組織中的平均光密度值分析 統(tǒng)計學(xué)分析表明，正常前列腺與BPH組織中PDCD5染色強(qiáng)度比

12、較無顯著性差異(p=0.290)。中低危組及高危組Pca組織中PDCD5染色強(qiáng)度與正常前列腺與BPH均存在顯著性差異(中低危組vs正常前列腺，p=0.000；中低危組vsBPH，p=0.001；高危組vs正常前列腺，p=0.000；高危組vsBPH，p=0.000)，此外，兩組間PDCD5染色強(qiáng)度亦存在顯著性差異(p=0.014)。 PDCD5免疫組化染色定量分析與前述半定量分析的統(tǒng)計學(xué)結(jié)果高度吻合，進(jìn)一步提示了PDCD5表達(dá)下

13、調(diào)與前列腺癌變及其惡性程度的相關(guān)性。 3.PCa組織中AR與PDCD5表達(dá)的相關(guān)性分析 AR在前列腺組織中表達(dá)于上皮細(xì)胞核內(nèi)，呈淺棕色或棕褐色染色。在總計22例PCa組織標(biāo)本中，有13例呈AR表達(dá)陽性，9例AR表達(dá)陰性 對PDCD5在AR(+)及AR(-)兩組間PCa組織中的表達(dá)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，校正后p值為0.060，結(jié)果表明兩者間比較無顯著性差異。 4.PEa組織中AR表達(dá)與PDCD5的平均光密度值分析

14、 統(tǒng)計學(xué)分析顯示，前列腺癌AR(+)及AR(-)兩組間PDCD5染色強(qiáng)度存在顯著性差異(p=0.006)，與前述定性分析的統(tǒng)計學(xué)結(jié)果不同，PDCD5免疫組化染色定量分析提示PDCD5在前列腺癌AR(+)組中表達(dá)要明顯強(qiáng)于AR(-)組。 5.AR在不同病理分級PCa組織中的表達(dá) 對AR在中低危組與高危組PCa組織中的的表達(dá)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，McNemar檢驗及一致性檢驗的校正后p值為分別為1.000及0.187，結(jié)果

15、表明兩者間的差異性及吻合度均無統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論： 1.PDCD5在正常前列腺及BPH組織中均呈較強(qiáng)的陽性表達(dá)，但兩者對比并無顯著差異。 2.PDCD5在PCa組織中的表達(dá)較正常組織及BPH均有顯著下降，并且隨著PCa惡性程度上升，PDCD5的表達(dá)進(jìn)一步下調(diào)，提示PDCD5可能在不同程度上參與了PCa發(fā)生、發(fā)展過程中腺細(xì)胞凋亡的調(diào)控。 3.PDCD5在前列腺癌AR(-)組中的表達(dá)要弱于AR(+)組，提示A