SMYD3提高雄激素受體表達促進前列腺癌發(fā)生的機制研究.pdf

1、背景:
　　 雄激素受體(androgenreceptor，AR)在前列腺癌的發(fā)生發(fā)展中起到關鍵性的作用，并且多數(shù)呈過表達狀態(tài)。雄激素-雄激素受體通路是正常前列腺腺體增長和前列腺癌發(fā)生的重要信號通路。當AR與雄激素結合并被激活后，AR磷酸化并轉移到細胞核內。在細胞核內，AR結合到染色質上相應的結合區(qū)域并激活靶基因的轉錄，這是前列腺發(fā)育和前列腺癌進展的重要環(huán)節(jié)。然而，很少有研究涉及到AR表達的表遺傳學調節(jié)。
　　 近期研究

2、證明表遺傳學在前列腺癌的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用，其中包括組蛋白修飾酶介導的AR信號通路作用，SMYD3(SETandMYNDdomain-containingprotein3)是新近發(fā)現(xiàn)的組蛋白甲基化酶，其識別并結合下游靶基因啟動子的特異性序列(CCCTCC)，引起組蛋白H3-K4雙甲基化/三甲基化，從而導致靶基因的轉錄功能。盡管SMYD3在人體正常組織中表達較弱或呈不表達狀態(tài)，然而其在多數(shù)結腸癌、肝癌和乳腺癌的發(fā)生及發(fā)展過程中呈過表達

3、狀態(tài)，并起到至關重要的作用。
　　 目的:
　　 研究組蛋白甲基化酶SMYD3在調節(jié)AR表達中的作用以及其對前列腺癌腫瘤細胞產(chǎn)生的影響。
　　 方法:
　　 收集臨床患者前列腺癌組織標本，通過蛋白印跡實驗和免疫組化實驗確定前列腺癌中SMYD3的表達情況。然后，在前列腺癌細胞系中轉染可以抑制SMYD3表達的shRNA或者siRNA，并通過細胞周期分析、細胞克隆形成分析、體內成瘤實驗和細胞凋亡實驗分析這種現(xiàn)象

4、。此外，通過相應的細胞實驗（實時定量PCR、免疫印跡和熒光報告分析等實驗）測試AR的表達和啟動子功能。并且通過染色質免疫共沉淀技術評估AR啟動子與Sp1、SMYD3和組蛋白修飾的結合情況。
　　 結果:
　　 收集到8例患者成對的新鮮組織標本，經(jīng)免疫印跡實驗分析，與癌旁組織相比，腫瘤組織中7例檢測到表達上調的SMYD3蛋白。25例前列腺癌切片標本中，經(jīng)免疫組化實驗檢測，8例SMYD3細胞核強染色，23例細胞質染色，良性前

5、列腺組織中僅表現(xiàn)為細胞質局部區(qū)域的弱染色。轉染shRNA或者siRNA敲除SMYD3后，前列腺癌細胞系的增值、克隆形成、細胞侵襲轉移和異體腫瘤形成均受到影響。在AR啟動子區(qū)域檢測到2個SMYD3功能性結合區(qū)域，可以直接激活AR基因的轉錄。SMYD3在AR啟動子區(qū)域誘導染色質重構，緊接著Sp1結合到此區(qū)域，兩者的結合共同上調AR的表達。
　　 結論:
　　 1.SMYD3在前列腺癌中表達水平上調;2.SMYD3沉默可以明顯