A-B同型雄激素受體與前列腺癌關(guān)系的研究.pdf

1、前列腺癌是泌尿系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一。根據(jù)2009年的數(shù)據(jù)，前列腺癌已經(jīng)成為歐洲和美國男性最大的殺手。前列腺是男性獨(dú)有的性腺器官，也是一種雄激素依賴的器官，而雄激素是通過其受體發(fā)揮作用的，雄激素受體(AR)則是雄激素代謝和發(fā)揮作用過程中的中心環(huán)節(jié)之一。因此，雄激素受體在前列腺癌的發(fā)生發(fā)展中占有重要地位。
　　 受孕激素受體(PR)亞型和雌激素受體(ER)亞型的啟發(fā)，1993年Carol在人的生殖器皮膚成纖維細(xì)胞中首次證實(shí)雄激素受

2、體A、B兩種同型受體的存在，分別是AR-B和AR-A。其中AR-B是完整、全長的雄激素受體，分子量為110 kDa，它是正常成人大多數(shù)組織中最常見雄激素受體亞型，所占比例高達(dá)80％～95％。而AR-A缺乏完整氨基端結(jié)構(gòu)，比AR-B少N端起始部位的188個(gè)氨基酸，它但其DNA結(jié)合區(qū)和激素結(jié)合區(qū)結(jié)構(gòu)完整，分子量為87 kDa，在正常成人大多數(shù)組織中表達(dá)水平較低，所占比例低于20％。目前尚無克隆AR-A mRNA的報(bào)道。雄激素存在A、B兩種同

3、型受體這種情況與孕激素受體(PR)極為相似：二者同為單一基因，轉(zhuǎn)錄一條mRNA，同樣存在完全轉(zhuǎn)錄和部分轉(zhuǎn)錄的A、B兩種同型受體。研究表明：子宮內(nèi)膜癌和乳腺癌的發(fā)病與孕激素A、B兩種同型受體存在著密切相關(guān)性，孕激素A、B受體的分布、表達(dá)和丟失與乳腺癌、卵巢腫瘤的內(nèi)分泌療效亦存在密切相關(guān)。也有研究表明，孕激素A、B兩種同型受體的生物學(xué)功能不同。
　　 與孕激素同型受體的研究相比，有關(guān)雄激素A、B同型受體的研究目前還只是方興未艾。Ca

4、talano在對(duì)結(jié)腸癌中AR的研究發(fā)現(xiàn)，在正常結(jié)腸粘膜中AR-A和AR-B均有表達(dá)，但在結(jié)腸癌組織中AR-B表達(dá)缺失，提示兩者在腫瘤的形成發(fā)展過程中可能發(fā)揮不同的作用。Liegibel等研究發(fā)現(xiàn)AR-A和AR-B兩者的功能不同。
　　 目的:
　　 研究A/B同型雄激素受體在不同前列腺組織中的表達(dá)，明確前列腺癌組織中A/B同型雄激素受體表達(dá)的變化，并研究探討A/B同型雄激素受體在前列腺癌中的功能，明確A/B同型雄激素受體

5、表達(dá)變化及功能差異在前列腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。
　　 方法：
　　 本研究旨在通過應(yīng)用Western blot、免疫熒光技術(shù)，研究分析50例前列腺癌、15例前列腺增生和15例正常前列腺組織中A/B同型雄激素受體蛋白的表達(dá)情況，從蛋白表達(dá)水平研究原發(fā)性前列腺癌組織中A/B同型雄激素受體蛋白表達(dá)水平的改變。同時(shí)應(yīng)用realtime-PCR技術(shù)研究不同前列腺組織中雄激素受體mRNA表達(dá)的變化。通過質(zhì)粒制作、質(zhì)粒轉(zhuǎn)染等技術(shù)初步

6、研究前列腺癌細(xì)胞中A/B同型雄激素受體蛋白的功能差異，觀察二者對(duì)前列腺癌PC3細(xì)胞增殖能力、侵襲能力、遷移能力的影響。
　　 結(jié)果:
　　 Western Blot結(jié)果顯示：各個(gè)前列腺癌、前列腺增生以及正常前列腺組織均表達(dá)AR-A與AR-B兩種同型雄激素受體。其中全長的AR-B雄激素受體是優(yōu)勢表達(dá)受體，占總數(shù)的95～80％，AR-A型雄激素受體表達(dá)量較低，占總數(shù)的5～20％，與文獻(xiàn)報(bào)道相符。正常前列腺組織和前列腺增生組織

7、中AR-A(P=0.703)和AR-B(P=0.505)表達(dá)量及AR-A/AR-B比值(P=0.871)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。前列腺癌組織中AR-A、AR-B雄激素受體表達(dá)量及AR-A/AR-B比值較正常前列腺中表達(dá)量本別增高2.8倍、1.47倍和1.92倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。較前列腺增生組織組織中AR-A、AR-B及AR-A/AR-B比值較正常前列腺中表達(dá)量本別增高2.38倍、1.37倍和1.75倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜

8、0.01)。AR-A和AR-B的表達(dá)與前列腺癌患者的年齡無關(guān)(p＞0.05)，但與前列腺癌Gleason評(píng)分有關(guān)。Gleason評(píng)分＞7的前列腺癌患者組織中AR-A的表達(dá)量較Gleason評(píng)分≤7的前列腺癌患者組織中增高1.25倍，同時(shí)AR-B增高1.15倍。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。而Gleason評(píng)分＜7的前列腺癌組織中，AR-A和AR-B的表達(dá)量及二者比例較正常前列腺組織和前列腺增生組織增高(P＜0.05)。臨床分期＞T2

9、期的前列腺癌患者組織中，AR-A和AR-B的表達(dá)量及二者比例較臨床分期≤T2期的前列腺癌患者組織高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能與臨床分期＞T2期的前列腺癌患者數(shù)量較少有關(guān)。為在組織中進(jìn)一步確證A/B同型雄激素受體蛋白的表達(dá)，我們使用雙重免疫熒光組織化學(xué)結(jié)果顯示：前列腺癌組織中AR-B和AR-A+B雄激素受體表達(dá)量較正常前列腺2.53倍和2.10倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。前列腺癌組織中AR-B和AR-A+B雄激素受體表達(dá)量較前列

10、腺增生組織中表達(dá)量增高2.31倍和1.93倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Gleason評(píng)分＞7的前列腺癌患者組織中AR-B的表達(dá)量較Gleason評(píng)分≤7的前列腺癌患者組織中增高1.25倍，同時(shí)AR-A+B增高1.15倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。A/B同型雄激素受體蛋白的表達(dá)臨床分期無關(guān)，可能與臨床分期＞T2期的前列腺癌患者數(shù)量較少有關(guān)。此結(jié)果與Western Blot結(jié)果相符。我們使用Realtime-PCR技術(shù)檢測

11、了前列腺癌，前列腺增生和正常前列腺標(biāo)本中AR mRNA的表達(dá)水平，結(jié)果顯示正常前列腺組織和前列腺增生組織中AR mRNA表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。前列腺癌組織中AR mRNA表達(dá)增高10.65倍(P=0.019)和11.93倍(P=0.019)。前列腺癌組織中，Gleason評(píng)分＞7的前列腺癌患者組織中AR mRNA的相對(duì)表達(dá)量增高，較Gleason評(píng)分≤7的前列腺癌患者組織中AR mRNA的表達(dá)量增高5.02倍。差異有統(tǒng)計(jì)

12、學(xué)意義(P＜0.05)。分期＞T2的前列腺癌患者組織中AR mRNA的相對(duì)表達(dá)量增高，較分期≤T2的前列腺癌患者組織中AR mRNA的表達(dá)量增高1.45倍，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，考慮與分期＞T2的前列腺癌組織僅僅4例，數(shù)量較少有關(guān)。
　　 在胞漿蛋白與胞核蛋白分別電泳的結(jié)果中，我們發(fā)現(xiàn)AR-A雄激素受體蛋白僅在胞漿蛋白中表達(dá)，胞核蛋白中不表達(dá)AR-A雄激素受體蛋白，而AR-B雄激素受體蛋白在胞漿蛋白和胞核蛋白中都有表達(dá)。進(jìn)一步研究結(jié)

13、果顯示：LNCaP細(xì)胞雄激素饑餓培養(yǎng)5天后，加入睪酮刺激2小時(shí)，AR-A雄激素受體蛋白可以在睪酮刺激下由細(xì)胞漿轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入LNCaP細(xì)胞核內(nèi)。在進(jìn)行免疫共沉淀后行Western Blot檢測的結(jié)果顯示：A/B同型雄激素受體二者不可形成異二聚體。此結(jié)果與AR-A/B在亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)分布不同相印證：如果AR-A與AR-B能形成異二聚體，則二者不可能在亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)分布上如此不同。
　　 為進(jìn)一步研究AR-A在前列腺癌細(xì)胞中的生物學(xué)活性，我們使用

14、pEGFP-AR質(zhì)粒通過突變后，制作出僅表達(dá)AR-A的新質(zhì)粒pEGFP-AR-A。通過質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)將AR-A轉(zhuǎn)染進(jìn)入不表達(dá)雄激素受體的前列腺癌細(xì)胞系PC3細(xì)胞，獲得僅僅表達(dá)AR-A的前列腺癌細(xì)胞PC3-AR-A。通過增殖實(shí)驗(yàn)我們發(fā)現(xiàn)，AR-A可以抑制前列腺癌細(xì)胞PC3細(xì)胞的增殖，抑制率在第3天以后維持在61％左右，而AR-B的抑制率僅維持在10％-20％。侵襲實(shí)驗(yàn)和增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，AR-A和AR-B都可以抑制前列腺癌細(xì)胞的侵襲能力和增

15、殖能力，AR-A轉(zhuǎn)染的PC3細(xì)胞的遷移、侵襲能力較PC3組降低20.6％和29.3％。AR轉(zhuǎn)染的PC3細(xì)胞侵襲、遷移能力最低，較PC3組降低39.4％和44.4％。
　　 結(jié)論:
　　 A/B同型雄激素受體在原發(fā)性前列腺癌的組織中表達(dá)量增高，且A/B二者比例增高。A/B同型雄激素受體蛋白的表達(dá)量和表達(dá)比例與病理分級(jí)及臨床分期有關(guān)。侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，AR-A可以降低前列腺癌細(xì)胞的侵襲能力和增殖能力。前列腺癌組織中的A/B同