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文檔簡介
1、丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)感染而引起的嚴(yán)重威脅人類健康的傳染病,目前還沒有研制成功有效的疫苗。HCV-E1包膜糖蛋白是HCV的結(jié)構(gòu)蛋白之一,具有重要的受體結(jié)合位點和抗原表位,在病毒感染和宿主免疫過程中起著十分重要的作用。其分子和功能特性的研究對HCV預(yù)防和治療的研究有重要意義。本研究通過構(gòu)建基于HCV-E1包膜糖蛋白B細(xì)胞表位序列,通過序列比較,選取幾個代表性基因型的中和性優(yōu)勢抗原表位的序列,
2、再結(jié)合泛DR輔助性T細(xì)胞表位(PADRE),一起構(gòu)建嵌合免疫原基因,克隆表達(dá)以獲得HCV-E1免疫原。 同時,針對目前人用免疫佐劑的局限性,及具有高效免疫調(diào)節(jié)作用CpG ODN存在體內(nèi)不穩(wěn)定性,序列的多樣性,作用具有物種和個體差異性等問題,研究設(shè)計并構(gòu)建了一個具有多個不同CpG ODN的重組質(zhì)粒,并將多個串連在一起,以克服CpG多樣性和個體差異性帶來的問題。同時,質(zhì)粒在體內(nèi)可有較高的穩(wěn)定性,也可增加組織細(xì)胞對其的攝取以增加其和受
3、體結(jié)合并激活免疫活性細(xì)胞的機會,以使CpG能最大限度地發(fā)揮其免疫調(diào)節(jié)作用。通過免疫動物,研究其免疫調(diào)節(jié)作用,以期該質(zhì)?;蚩捎糜谝呙缑庖咦魟?,也可用于感染、癌癥和過敏性疾病的免疫治療。 根據(jù)上述實驗思路:(1)合成了包含多個基因型的具有免疫中和活性的表位基因,利用pBVILl載體,在大腸桿菌中獲得高效表達(dá),并得到有效純化,獲得了多型別HCV-E1表位免疫原。 (2)構(gòu)建了一系列具有免疫激活作用的pUCpGs質(zhì)粒,根據(jù)該質(zhì)粒
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