SPIO標記人內皮細胞的生物學特性及MR成像實驗研究.pdf

1、研究背景：
　　 研究表明血管損傷后循環(huán)內皮細胞可以通過降低內膜增生的形成對于表面的再內皮化過程起到一定的積極作用。建立一種有效的活體療效評價手段，即監(jiān)測移植的內皮細胞在體內存活、增殖、遷移和分化情況，對進一步探討細胞移植對臟器功能改善的機制和指導未來細胞移植的臨床應用都具有相當重要的意義。
　　 研究目的：
　　 初步探索利用/不同濃度超順磁性氧化鐵（superparamagnetic iron oxide，

2、SPIO）和多聚賴氨酸（Poly-L-lysine，PLL）特異性標記人內皮細胞（ECV-304），于體外對標記前后的ECV-304活性，增殖，凋亡，ROS、白噬性溶酶體的產生等情況進行研究，探索SPIO標記細胞的最佳條件及對內皮細胞的生物學特性影響，探討SPIO示蹤標記動脈粥樣斑塊可行性，為今后的進一步研究工作提供技術參考。
　　 材料和方法：
　　 不同濃度的超順磁性氧化鐵-多聚賴氨酸復合物（SPIO-PLL）特異性

3、標記ECV-304，借助光學顯微鏡、透射電鏡、原子發(fā)射光譜儀對細胞內的鐵和標記效率進行定性和定量的檢測。借助于激光共聚焦顯微鏡和活性氧（ROS）、自噬性溶酶體、線粒體膜電位（△ψm）分子探針，體外檢測高濃度SPIO誘導的ROS和自噬性溶酶體的產生以及△ψm的變化情況。對標記后的ECV-304使用1.5 T磁共振成像（MRI）體外掃描。對模型動物經靜脈注射SPIO和移植SPIO標記的血管內皮細胞對兔早期動脈粥樣硬化斑塊模型結合組織病理學進

4、行對照研究。
　　 結果：
　　 普魯士藍染色顯示經SPIO-PLL復合物標記ECV-304后，其胞質內出現(xiàn)藍色鐵顆粒，電鏡下觀察細胞形態(tài)，體積，細胞器無明顯變化，胞質內含有包裹SPIO顆粒的囊泡；計數統(tǒng)計表明，標記24 h標記率即達到100％；延長標記時間并不會使細胞內鐵含量增加；SPIO-PLL復合物在50 μg/ml以下時，對細胞活力無顯著影響。共聚焦顯微鏡及流式細胞儀的結果顯示，高于50 μg/ml的SPIO-P

5、LL會使細胞內ROS產生量增加，△ψm下降，自噬性溶酶體數量增加，細胞凋亡有增加的趨勢，經過L-N-乙酰半胱氨酸（L-NAC）預處理，ROS產生減少，細胞凋亡率降低。在對體外標記的細胞MRI各掃描序列中以T2*WI系列上標記前后的MR信號強度改變（△SI）最大且與細胞數量有關。病理分析顯示外周靜脈直接注射SPIO動脈粥樣硬化模型動物的肝臟枯可細胞中有普魯士藍染色陽性顆粒；移植經SPIO標記的血管內皮細胞實驗組中，血管壁粥樣斑塊內可見染色