溶藻弧菌質粒及耐藥性和致病性的研究.pdf

1、本研究主要從海南島部分近岸海域和患病水產動物體內分離不同的溶藻弧菌菌株，研究該地區(qū)溶藻弧菌的質粒、耐藥性和致病性，并探討其質粒與耐藥性和致病性的關系，研究結果如下： 1.以海南島近岸海域內的生活養(yǎng)殖混合區(qū)、養(yǎng)殖區(qū)和患病水產動物體內外(病灶及各臟器部位)為菌種分離對象，采用TCBS培養(yǎng)基進行溶藻弧菌菌株分離，通過溶藻弧菌快速鑒定試劑盒和傳統(tǒng)的生化鑒定相結合的方法，從約115株細菌中快速、準確分離到60株不同來源的溶藻弧菌分離株，其

2、中，生活養(yǎng)殖混合區(qū)23株，養(yǎng)殖區(qū)29株，患病水產動物8株； 2.采用堿裂解法提取溶藻弧菌各菌株的質粒，構建其質粒圖譜。在所研究的60株溶藻弧菌中，12株菌株攜帶有質粒，質粒攜帶率為20％；這些菌株所攜帶的質粒包括11種不同的類型，其大小從1 kb到60 kb之間，每個菌株攜帶1～3個質粒。根據所攜帶質粒的大小與數量的不同，這60株菌株可分為7種質粒類型。在上述不同來源的菌株中，生活養(yǎng)殖混合區(qū)的攜帶質粒菌株的數量最多，共9株；其次

3、是患病水產動物體內外的菌株，共2株；最少的是養(yǎng)殖區(qū)菌株，只有1株。 3.采用美國臨床標準委員會(NCCLS)推薦的K-B瓊脂法和杭州微生物試劑有限公司生產的40種成套藥敏紙片進行藥敏實驗。結果表明，溶藻弧菌分離株的耐藥性嚴重，每株菌株都有程度不同的“耐藥”現象。對50％以上的菌株都顯示“耐藥”的抗生素有23種，占檢測藥物總數的57.5％；對80％以上的菌株都顯示“耐藥”的抗生素有17種，占總藥物種類的42.5％。所有菌株都有不同

4、程度的多重耐藥現象，多重耐藥率達100％。方差分析結果表明，生活養(yǎng)殖混合區(qū)分離株和養(yǎng)殖區(qū)分離株之間的耐藥性差異顯著(P<0.05)，生活養(yǎng)殖混合區(qū)分離株和患病水產動物體內外分離株之間的耐藥性差異也達到了顯著水平(P<0.05)。對所分離的各菌株的耐藥性的研究結果表明，這些菌株對美洛西林等16種抗生素的耐藥譜完全相同，說明這些藥物的耐藥基因很可能存在于這些菌株的質粒DNA中。 4.將12株攜帶不同質粒的菌株和隨機抽取的10株不攜帶

5、質粒的菌株分別感染野生鯔魚(Mugil cephalus Linnseus)，從中篩選溶藻弧菌的毒株。攜帶質粒的菌株HN06016(質粒Ⅰ型)、HN06002(質粒Ⅱ型)和 HN06003(質粒Ⅳ型)和不攜帶質粒的菌株(質粒Ⅶ型)：HN06030和HN05005都對實驗動物表現出較強的毒力，它們的LD<,50>分別為：HN06016：1.29×10<'5> CFU/g；HN06002：1.26×10<'5> CFU/g；HN06003：