犬子宮蓄膿大腸桿菌毒力基因及其LD50、耐藥性和致病性研究.pdf

1、在小動物臨床上，犬子宮蓄膿是一種常見的生殖系統(tǒng)疾病，嚴(yán)重影響犬的生殖能力甚至威脅生命。
　　本研究的目的在于:(1)分離鑒定犬子宮蓄膿細(xì)菌種類，分析大腸桿菌分離株的同源性;(2)檢測和分析犬子宮蓄膿大腸桿菌的毒力基因及其毒力和耐藥性;(3)研究不同毒力的大腸桿菌對復(fù)制子宮內(nèi)膜囊性增生/子宮蓄膿(CEH/P)動物模型及其毒力的影響。
　　本試驗采取:(1)對患病犬子宮內(nèi)容中的細(xì)菌進(jìn)行常規(guī)分離培養(yǎng)、生化鑒定，并保存菌種;運用多位

2、點序列分型(MLST)方法分別對大腸桿菌分離株的7個保守基因進(jìn)行測序，并在數(shù)據(jù)庫中確定大腸桿菌的分型，進(jìn)行親緣性比較，繪制同源性進(jìn)化圖;(2)針對大腸桿菌分離株，采用PCR技術(shù)檢測其毒力基因的分布，選用小鼠半數(shù)致死量方法檢測其毒力，并對分離株進(jìn)行20種抗菌藥物敏感試驗;(3)選取臨床表現(xiàn)健康、未有配種生育經(jīng)歷的9只雌性中華田園犬進(jìn)行CEH/P動物模型復(fù)制。試驗分3組，每組3只犬。第1、2組為試驗組，第3組為對照組。先對試驗組和對照組犬進(jìn)

3、行卵巢摘除術(shù)。與此同時，試驗組犬左側(cè)子宮角內(nèi)埋置縫線，術(shù)后3～4周，試驗組犬注射雌激素和孕酮，在其進(jìn)入發(fā)情后期12 d后，將毒力較強的大腸桿菌灌注到第1組試驗犬子宮中，將毒力較弱的大腸桿菌灌注到第2組試驗犬子宮中;在CEH/P動物模型復(fù)制成功后，對試驗犬子宮內(nèi)容物中細(xì)菌進(jìn)行分離培養(yǎng)，采用大腸桿菌MLST方法檢驗其是否為灌注的大腸桿菌，并對大腸桿菌的毒力進(jìn)行檢測，與灌注前的毒力進(jìn)行對比。
　　結(jié)果表明:(1)在26例犬子宮內(nèi)容物中有

4、23例分離到病原菌,3例無細(xì)菌生長。生化檢測顯示，其中分離到大腸桿菌11例(47.8％)、金黃色葡萄球菌5例(21.7％)、克雷伯菌3例(13.0％)、，鏈球菌3例(13.0％)及銅綠假單胞菌1例(4.5％);MLST分型結(jié)果顯示，子宮蓄膿中大腸桿菌與腸道內(nèi)糞源性大腸桿菌的親緣性進(jìn)化關(guān)系并不密切，但與尿道致病性大腸桿菌的某些菌株進(jìn)化關(guān)系較親近。(2)發(fā)現(xiàn)不同毒力基因分布的大腸桿菌之間存在毒力差異，含有毒力基因較多的分離株毒力相對較強;分

5、離株對青霉素、苯唑西林、紅霉素等有較高的耐藥性，而對其他藥物，尤其是氨基糖苷類抗生素、頭孢類抗生素等則有較高的敏感性。(3)兩組試驗組分別灌注強、弱毒大腸桿菌犬均成功地復(fù)制CEH/P模型，說明大腸桿菌的毒力強弱對感染犬致CEH/P的影響不大，其并非致病的決定性因素;復(fù)制后CEH/P模型大腸桿菌毒力大部分增強，與灌注前比較差異顯著(P＜0.05)，但也有不顯著(P＞0.05)。
　　結(jié)論:(1)大腸桿菌是犬子宮蓄膿病原菌的優(yōu)勢菌種，