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文檔簡介
1、目的: 當(dāng)今非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD) 已經(jīng)成為社會公共健康問題,其發(fā)病率逐年升高,但具體的發(fā)病機制現(xiàn)還未闡明,從而使藥物的開發(fā)及臨床治療受阻。目前已有大量的文獻報道其發(fā)病與多種脂肪因子如:Adiponectin、Leptin、Resistin等有關(guān)。Chemerin為新近發(fā)現(xiàn)的脂肪因子,有研究發(fā)現(xiàn)其在肝臟及脂肪組織高表達,但其與NAFLD的關(guān)系目前尚未見文
2、獻報道。為此我們想通過構(gòu)建不同的NAFLD模型,觀察不同的NAFLD模型Chemerin 及Chemerin 受體(chemerin-like-receptor1,CMKLR1)的表達變化,探討肝臟局部Chemerin 及CMKLR1的表達與NAFLD的發(fā)病是否有關(guān)。 Chemerin 又名他扎羅汀誘導(dǎo)的基因2(Tazarotene induced gene 2,tig2),在皮膚組織中可由他扎羅汀誘導(dǎo)表達。全反式維甲酸(all
3、 trans-retinoicacid,ATRA)及他扎羅汀均為維生素A的衍生物。Chemerin 在肝組織中是否也可由維甲酸類藥物誘導(dǎo)表達呢?因此我們選用HepG2細(xì)胞觀察ATRA 對其Chemerin 表達的影響。 方法: 第一部分:22只C57BL/6小鼠隨機分成兩組,正常組(NC,n=10)和高脂組(HF,n=12)。分別用普通飼料和高脂飼料喂養(yǎng)18周后進行腹腔注射葡萄糖耐量試驗(intraperitoneal
4、glucose tolerance test,IPGTT)和胰島素耐量試驗(insulin tolerance test,ITT),試驗3天后處死。檢測血清膽固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、游離脂肪酸(free fatty acid,F(xiàn)FA)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein
5、,HDL)、肝功能及肝臟甘油三酯(TG)含量,并做HE染色觀察肝臟形態(tài)變化;采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time Polymerase Chain Reaction,real-time PCR)檢測細(xì)胞因子chemerin及其受體CMKLR1 mRNA水平的表達變化。 第二部分:12只wistar雄性大鼠隨機分成兩組,對照組(con,n=6)和MCD組(MCD,n=6),分別用普通飼料及膽堿蛋氨酸缺乏(methion
6、ine-choline-deficient,MCD) 飼料喂養(yǎng)四周構(gòu)建NAFLD模型。檢測血清TC、TG、LDL、HDL、肝功能及肝臟TG含量,并做HE染色及天狼猩紅染色觀察肝臟形態(tài)變化; 采用Real-time PCR檢測細(xì)胞因子chemerin、CMKLR1、RARβ及TNF-amRNA水平的表達變化;進一步用Northern blot方法驗證chemerin在mRNA水平的表達變化。 第三部分:培養(yǎng)HepG2細(xì)胞株
7、,加入全反式維甲酸(all trans-retinoic acid,ATRA)觀察其對Chemerin表達的影響。采用real-time PCR檢測chemerin在mRNA水平的表達變化;用western blot檢測chemerin在蛋白水平的表達變化。 結(jié)果: 1.與普通飼料組相比,經(jīng)高脂飼料喂養(yǎng)18周的C57BL/6小鼠存在胰島素敏感性下降及血脂代謝紊亂;肝功能受損、肝臟TG增加、肝臟HE染色存在脂肪變及炎癥;肝
8、臟中Chemerin的mRNA表達下降、CMKLR1的mRNA表達上升。 2.與普通飼料組相比,經(jīng)MCD喂養(yǎng)4周wistar大鼠血糖下降;體重及脂肪組織質(zhì)量減輕,血脂下降;肝功能受損、肝臟TG增加、肝臟HE染色存在脂肪變及炎癥;肝臟中Chemerin及RARb的mRNA表達下降、CMKLR1及TNF-a的mRNA表達上升。 3.ATRA可促進HepG2細(xì)胞Chemerin mRNA及蛋白水平的表達。 結(jié)論:
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