chemerin和其受體在非酒精性脂肪肝病中表達(dá)變化及維甲酸對(duì)chemerin表達(dá)影響.pdf

1、目的： 當(dāng)今非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD) 已經(jīng)成為社會(huì)公共健康問(wèn)題，其發(fā)病率逐年升高，但具體的發(fā)病機(jī)制現(xiàn)還未闡明，從而使藥物的開(kāi)發(fā)及臨床治療受阻。目前已有大量的文獻(xiàn)報(bào)道其發(fā)病與多種脂肪因子如：Adiponectin、Leptin、Resistin等有關(guān)。Chemerin為新近發(fā)現(xiàn)的脂肪因子，有研究發(fā)現(xiàn)其在肝臟及脂肪組織高表達(dá)，但其與NAFLD的關(guān)系目前尚未見(jiàn)文

2、獻(xiàn)報(bào)道。為此我們想通過(guò)構(gòu)建不同的NAFLD模型，觀察不同的NAFLD模型Chemerin 及Chemerin 受體（chemerin-like-receptor1，CMKLR1）的表達(dá)變化，探討肝臟局部Chemerin 及CMKLR1的表達(dá)與NAFLD的發(fā)病是否有關(guān)。 Chemerin 又名他扎羅汀誘導(dǎo)的基因2（Tazarotene induced gene 2，tig2）,在皮膚組織中可由他扎羅汀誘導(dǎo)表達(dá)。全反式維甲酸（all

3、 trans-retinoicacid，ATRA）及他扎羅汀均為維生素A的衍生物。Chemerin 在肝組織中是否也可由維甲酸類藥物誘導(dǎo)表達(dá)呢？因此我們選用HepG2細(xì)胞觀察ATRA 對(duì)其Chemerin 表達(dá)的影響。 方法： 第一部分：22只C57BL/6小鼠隨機(jī)分成兩組，正常組(NC，n=10)和高脂組(HF，n=12)。分別用普通飼料和高脂飼料喂養(yǎng)18周后進(jìn)行腹腔注射葡萄糖耐量試驗(yàn)（intraperitoneal

4、glucose tolerance test，IPGTT）和胰島素耐量試驗(yàn)(insulin tolerance test，ITT)，試驗(yàn)3天后處死。檢測(cè)血清膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）、游離脂肪酸（free fatty acid，F(xiàn)FA）、低密度脂蛋白（low density lipoprotein，LDL）、高密度脂蛋白（high density lipoprotein

5、，HDL）、肝功能及肝臟甘油三酯(TG)含量，并做HE染色觀察肝臟形態(tài)變化；采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time Polymerase Chain Reaction，real-time PCR)檢測(cè)細(xì)胞因子chemerin及其受體CMKLR1 mRNA水平的表達(dá)變化。 第二部分：12只wistar雄性大鼠隨機(jī)分成兩組，對(duì)照組(con，n=6)和MCD組(MCD，n=6)，分別用普通飼料及膽堿蛋氨酸缺乏(methion

6、ine-choline-deficient，MCD) 飼料喂養(yǎng)四周構(gòu)建NAFLD模型。檢測(cè)血清TC、TG、LDL、HDL、肝功能及肝臟TG含量，并做HE染色及天狼猩紅染色觀察肝臟形態(tài)變化； 采用Real-time PCR檢測(cè)細(xì)胞因子chemerin、CMKLR1、RARβ及TNF-amRNA水平的表達(dá)變化；進(jìn)一步用Northern blot方法驗(yàn)證chemerin在mRNA水平的表達(dá)變化。 第三部分：培養(yǎng)HepG2細(xì)胞株

7、，加入全反式維甲酸（all trans-retinoic acid，ATRA）觀察其對(duì)Chemerin表達(dá)的影響。采用real-time PCR檢測(cè)chemerin在mRNA水平的表達(dá)變化；用western blot檢測(cè)chemerin在蛋白水平的表達(dá)變化。 結(jié)果： 1．與普通飼料組相比，經(jīng)高脂飼料喂養(yǎng)18周的C57BL/6小鼠存在胰島素敏感性下降及血脂代謝紊亂；肝功能受損、肝臟TG增加、肝臟HE染色存在脂肪變及炎癥；肝

8、臟中Chemerin的mRNA表達(dá)下降、CMKLR1的mRNA表達(dá)上升。 2．與普通飼料組相比，經(jīng)MCD喂養(yǎng)4周wistar大鼠血糖下降；體重及脂肪組織質(zhì)量減輕，血脂下降；肝功能受損、肝臟TG增加、肝臟HE染色存在脂肪變及炎癥；肝臟中Chemerin及RARb的mRNA表達(dá)下降、CMKLR1及TNF-a的mRNA表達(dá)上升。 3．ATRA可促進(jìn)HepG2細(xì)胞Chemerin mRNA及蛋白水平的表達(dá)。 結(jié)論：