藏藥濕生扁蕾中口山酮類化合物抗癌活性及其機理研究.pdf

1、癌癥是一種因細胞增殖失控而引發(fā)的嚴重疾病。全世界每年的死亡人數中每100，000人中至少有100到350人死于癌癥；而在中國每年的疾病死亡人口中有高達1/5的人是死于癌癥及其相關疾病。癌癥的治療一直是各國醫(yī)學工作者所熱切關注的研究課題。
　　 濕生扁蕾是龍膽科（Gentianaceae）扁蕾屬（Gentianopsis plaudosa Ma）一年生草本植物，主要分布在中國，印度，尼泊爾，不丹及錫金等國。作為一種傳統(tǒng)中藥，該植物

2、在青藏高原地區(qū)被廣泛運用，臨床主要用于肝炎，腸胃炎，結膜炎，急性腎盂腎炎等癥的治療。近年來，隨著濕生扁蕾有效成分研究的深入，其新的藥效成分及功效也不斷被發(fā)現。
　　 本研究對藏藥濕生扁蕾中四種口山酮化合物的抗癌活性進行了篩選（1，8-二羥基-3，7-二甲氧基口山酮(Compound 1)、1-羥基-3，7，8-三甲氧基口山酮（Compound 2）、1，7-二羥基-3，8-二甲氧基口山酮（Compound 3）、1-0-β-D-

3、葡萄糖苷-7-羥基-3.8-二甲氧基口山酮（Compound 4））。利用SRB法對四種化合物的細胞毒性進行了檢測；并通過集落形成法，臺盼藍排染法，AO/EB雙染法，DNA瓊脂糖凝膠電泳及流式細胞術對四種化合物的體外細胞增殖抑制能力和誘導細胞凋亡的能力進行了系統(tǒng)檢測；并對四種化合物的構效關系進行了系統(tǒng)分析。結果顯示，Compound 1~4對HepG2細胞和HL-60細胞具有較強的細胞毒性，能夠顯著抑制兩種細胞的增殖，誘導細胞發(fā)生凋亡。

4、其毒活性趨勢為：HepG2細胞中，Compound 3>Compound 2> Compound 4> Compound 1；HL-60細胞中，Compound 2>Compound 3> Compound 4> Compound 1。通過對其構效關系分析，結果顯示口山酮結構中C-8位的甲氧基較羥基具有更強的細胞毒貢獻；而對于Compound 4的C-1位糖基而言，可能因其較大的空間位阻使得Compound 4的活性發(fā)生了明顯下降。

5、r>　　 此外，本研究對上述四種化合物中抗癌活性最強的化合物Compound 2的抗癌機理進行了進一步的研究。其中形態(tài)學觀察及臺盼藍排染法結果顯示，當低濃度的Compound 2 (12.4 to 74.4μg/ml)處理HL-60細胞后，細胞呈現出明顯的時間劑量依賴性生長抑制。流式細胞術分析結果顯示，不同濃度Compound 2能夠分別使細胞阻滯在G1期及G2/M期。AO/EB雙染實驗，DNA瓊脂糖凝膠電泳實驗及流式細胞術分析實驗的

6、結果顯示，高濃度的Compound 2 (82.7 to 330.8μg/ml)能夠誘導HL-60細胞發(fā)生明顯的凋亡現象。另外，彗星電泳結果顯示，Compound 2對HL-60細胞具有較強的DNA損傷作用。簡言之，所有結果表明，Compound 2對HL-60細胞具有明顯的細胞毒性，能夠誘導該細胞發(fā)生時間和劑量依賴性的生長抑制及細胞凋亡。其可能的抗癌作用機制為Compound 2引起了HL-60細胞不同程度的DNA損傷，從而使低濃度C