急性炎癥對(duì)黑色素瘤微血管密度及明膠酶表達(dá)與活性影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:建立黑色素瘤急性炎癥小鼠模型,利用免疫組化染色與明膠酶譜技術(shù),觀察急性炎癥對(duì)腫瘤體積、微血管密度、明膠酶表達(dá)與活性的影響,闡明急性炎癥對(duì)進(jìn)展期腫瘤生長(zhǎng)的影響,初探其分子機(jī)制。
　　 內(nèi)容:
　　 1.急性炎癥-黑色素瘤模型的建立:通過(guò)制造單純傷口與施加重復(fù)擴(kuò)創(chuàng)、創(chuàng)面涂抹金黃色葡萄球菌、創(chuàng)面涂抹冰乙酸等手段,建立四種對(duì)應(yīng)小鼠模型,比較優(yōu)劣,選擇合適的急性炎癥.黑色素瘤模型。
　　 2.急性炎癥對(duì)黑色素瘤體積的

2、影響:建立重復(fù)擴(kuò)創(chuàng)-黑色素瘤模型,比較對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組腫瘤體積的變化。
　　 3.急性炎癥對(duì)微血管密度的影響:建立小鼠黑色素瘤.重復(fù)擴(kuò)創(chuàng)模型,通過(guò)HE巳染色比較對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組微血管密度,明確內(nèi)皮依賴(lài)性血管在炎癥環(huán)境中的變化。
　　 4.急性炎癥對(duì)黑色素瘤明膠酶表達(dá)及活性的影響:通過(guò)免疫組化染色比較對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組明膠酶的表達(dá)情況,明膠酶譜分析對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組明膠酶的活性。
　　 方法:
　　 1.在荷瘤鼠上分別

3、建立單純創(chuàng)傷模型,重復(fù)擴(kuò)創(chuàng)模型,創(chuàng)傷+化膿菌模型,創(chuàng)傷+冰乙酸模型。
　　 2.每日觀察創(chuàng)面情況,記錄腫瘤長(zhǎng)短徑,計(jì)算腫瘤體積,繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線,比較不同模型對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響。
　　 3.根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,建立重復(fù)擴(kuò)創(chuàng)-黑色素瘤模型。
　　 4.每日觀察創(chuàng)面情況,記錄腫瘤長(zhǎng)短徑,繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線,建立急性炎癥模型第5天處死所有小鼠。
　　 5.利用公式計(jì)算各組腫瘤不同觀測(cè)點(diǎn)時(shí)的體積,并進(jìn)行比較6.HE染色,

4、高倍光鏡下辨認(rèn)微血管,按Weidner法計(jì)數(shù)腫瘤組織樣本中微血管數(shù)。
　　 7.免疫組化標(biāo)記明膠酶陽(yáng)性細(xì)胞,免疫反應(yīng)積分法分析腫瘤組織樣本中明膠酶的表達(dá)水平。明膠酶譜分析腫瘤組織樣本中明膠酶活性。
　　 結(jié)果:
　　 1.不同急性炎癥黑色素瘤模型的效果:重復(fù)擴(kuò)創(chuàng)-黑色素瘤模型,創(chuàng)傷+化膿菌-黑色素瘤模型,創(chuàng)傷+冰乙酸-黑色素瘤模型中腫瘤生長(zhǎng)被抑制。單純創(chuàng)傷-黑色素瘤模型對(duì)腫瘤生長(zhǎng)幾乎無(wú)影響。本研究小組選擇重復(fù)擴(kuò)創(chuàng)

5、-黑色素瘤模型作為下階段實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型2.急性炎癥對(duì)黑色素瘤腫瘤體積的影響:實(shí)驗(yàn)組腫瘤體積增長(zhǎng)速度慢于對(duì)照組。
　　 3.急性炎癥對(duì)黑色素瘤內(nèi)皮依賴(lài)性血管的影響:對(duì)照組MVD為23.240±2.289,實(shí)驗(yàn)組為16.560±1.325,實(shí)驗(yàn)組內(nèi)皮依賴(lài)性血管少于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 4.急性炎癥對(duì)黑色素瘤明膠酶表達(dá)及活性的影響:實(shí)驗(yàn)組明膠酶表達(dá)及活性低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:
　　

6、 1.建立了單純創(chuàng)傷-黑色素瘤,重復(fù)擴(kuò)創(chuàng)-黑色素瘤,創(chuàng)傷+化膿菌-黑色素瘤,創(chuàng)傷+冰乙酸-黑色素瘤四種急性炎癥-腫瘤復(fù)合模型。結(jié)果表明,單純創(chuàng)傷-黑色素瘤模型對(duì)腫瘤生長(zhǎng)無(wú)影響,后三者均可抑制腫瘤生長(zhǎng)且對(duì)腫瘤生長(zhǎng)抑制程度相同,說(shuō)明一過(guò)性炎癥對(duì)腫瘤生長(zhǎng)不產(chǎn)生影響,只有達(dá)到一定的強(qiáng)度并持續(xù)一定時(shí)間,方可抑制腫瘤的生長(zhǎng)。
　　 2.本研究建立的三種有效抑制腫瘤生長(zhǎng)的動(dòng)物模型,在創(chuàng)面愈合情況、操作技術(shù)水平和實(shí)驗(yàn)室條件和管理的要求等方面各