人羊膜細(xì)胞在纖維蛋白支架上的三維培養(yǎng)用于胎膜早破的研究.pdf

1、目的：構(gòu)建人羊膜細(xì)胞在纖維蛋白支架上三維培養(yǎng)模型，觀察人羊膜細(xì)胞能否在纖維蛋白支架上生長；觀察人羊膜細(xì)胞在纖維蛋白支架上的生物學(xué)特性，探討人羊膜細(xì)胞/纖維蛋白支架復(fù)合物模擬正常羊膜組織用于胎膜早破破口修復(fù)的新途徑。 方法：1、原代培養(yǎng)并分離純化人羊膜上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞。2、采用膠內(nèi)型三維立體培養(yǎng)，在纖維蛋白聚合前，將羊膜間質(zhì)細(xì)胞和纖維蛋白溶液混合，纖維蛋白聚合后，采用膠上型三維立體培養(yǎng)，將羊膜上皮細(xì)胞接種到纖維蛋白支架表面，構(gòu)建

2、人羊膜細(xì)胞/纖維蛋白支架復(fù)合物，模擬正常羊膜組織。3、采用掃描電鏡觀察纖維蛋白支架的形態(tài)；纖維蛋白支架表面人羊膜上皮細(xì)胞的形態(tài)；細(xì)胞間的接觸；細(xì)胞與支架的接觸。采用透射電鏡觀察在纖維蛋白膠內(nèi)生長的人羊膜間質(zhì)細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)和纖維蛋白束的形成。耦合羅丹明的鬼筆環(huán)肽染色可特異性的標(biāo)記顯示細(xì)胞骨架中的微絲（F-actin）結(jié)構(gòu)，激光共聚焦逐層掃描，觀察不同深度層面的信息，并通過計(jì)算機(jī)軟件處理，對人羊膜細(xì)胞/纖維蛋白支架復(fù)合物進(jìn)行三維重建。4、繪

3、制羊膜細(xì)胞在普通平面培養(yǎng)和三維立體培養(yǎng)中的生長曲線，觀察羊膜細(xì)胞在不同培養(yǎng)條件下的增殖。5、制備羊膜細(xì)胞三維培養(yǎng)模型，動態(tài)觀察羊膜細(xì)胞在纖維蛋白支架中的游走，并觀察在不同條件下纖維蛋白膠的收縮。 結(jié)果：1、人羊膜細(xì)胞在纖維蛋白支架上生長良好，細(xì)胞沿支架伸展，細(xì)胞間有偽足伸出，細(xì)胞分泌功能良好。人羊膜細(xì)胞/纖維蛋白支架復(fù)合物表面的上皮細(xì)胞分布在同一平面，形成片狀，羊膜間質(zhì)在內(nèi)部分布在不同平面，與正常羊膜組織類似。2、羊膜細(xì)胞在普通

4、平面培養(yǎng)下，增殖能力旺盛，在三維立體培養(yǎng)中增殖較緩慢，增長幅度較平面培養(yǎng)低。3、羊膜間質(zhì)細(xì)胞隨時間推移在纖維蛋白支架中游走，形成細(xì)胞團(tuán)。4、在含羊膜間質(zhì)細(xì)胞的支架復(fù)合物中，纖維蛋白膠隨時間增長而發(fā)生收縮。 結(jié)論：1、人羊膜上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞在纖維蛋白支架上生長良好，羊膜細(xì)胞和纖維蛋白支架相互作用，模擬了羊膜細(xì)胞在體內(nèi)的生物學(xué)環(huán)境。2、人羊膜細(xì)胞/纖維蛋白支架復(fù)合物有可能成為胎膜早破破口修復(fù)的組織替代物，為胎膜早破的治療提供新方法