成纖維細(xì)胞與明膠海綿支架三維共培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:應(yīng)用組織塊法體外培養(yǎng)原代成纖維細(xì)胞,觀察細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)特點(diǎn)、增殖能力以及細(xì)胞與醫(yī)用可吸收明膠海綿體外共培養(yǎng)情況,為進(jìn)一步研究成纖維細(xì)胞在組織工程學(xué)的應(yīng)用打下基礎(chǔ)。
　　 方法:取4-6月齡新西蘭大白兔,取其皮下筋膜組織,組織塊法培養(yǎng)原代成纖維細(xì)胞。傳代至第3代。倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),免疫組織學(xué)染色后共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),分別應(yīng)用MTT和CCK8試劑盒研究細(xì)胞生長(zhǎng)增殖規(guī)律,并對(duì)兩種方法進(jìn)行比較,Ⅰ/Ⅲ型膠原蛋白染色觀察

2、其分泌蛋白情況,PKH26標(biāo)記下用掃描電鏡觀察成纖維細(xì)胞與明膠海綿體外共培養(yǎng)情況。
　　 結(jié)果:用筋膜組織行組織塊法培養(yǎng)可成功得到大量原代成纖維細(xì)胞,此法取材廣泛,過程簡(jiǎn)單,成纖維細(xì)胞于體外培養(yǎng)時(shí)增殖活躍。分別用CCK8與MTT法連續(xù)觀察7天,于細(xì)胞周期的第4-5天后細(xì)胞出現(xiàn)增殖平臺(tái)期(平均4.1±2.0天和4.6±1.7天)。兩種方法比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。免疫組織學(xué)染色后共聚焦顯微鏡觀察可見細(xì)胞為典型的成纖維細(xì)