Wnt拮抗劑SFRP4在胰腺癌中的異常表達(dá)及其機(jī)制.pdf

1、目的：Wnt家族廣泛地參與了生物胚胎的一些基本發(fā)育過程，以及成體細(xì)胞增殖、分化和凋亡過程。SFRPs為分泌型蛋白質(zhì)，全稱為分泌型Frizzled相關(guān)蛋白，該家族成員SFRP<,1-5>一樣，大約由300多個氨基酸組成，其中含有一個氨基端附近的CRD區(qū)域,該區(qū)域內(nèi)含有10個高度保守的半胱氨酸，與Frizzled的胞外CRD區(qū)域有30-40％的同源性。SFRP4是Wnt信號通路的負(fù)調(diào)控因子，在一些腫瘤組織中它的表達(dá)明顯減弱或消失，例如在乳腺

2、、結(jié)直腸、前列腺、卵巢。SFRP4基因的染色體區(qū)域在一些腫瘤中經(jīng)常缺失，這被認(rèn)為是削弱了抑癌基因。作為SFRPs家族的一個成員，一些研究提示在腫瘤的發(fā)生中SFRP4的表達(dá)消失起了重要的作用。 目的:探討SFRP4在胰腺癌中的甲基化及表達(dá)情況，同時對SFRP4異常表達(dá)與患者臨床病理特征之間相關(guān)性進(jìn)行分析。 材料和方法 1、材料 (1)人類胰腺癌細(xì)胞系CFPAC-1，PC-3和PANC-1購自上海昆肯生物有限

3、公司。胰腺癌及相應(yīng)的癌旁組織各36例，均來自于中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院2005．2006年手術(shù)切除標(biāo)本。標(biāo)本獲取后即冷凍于液氮之中，并保存在-80℃條件下備用。采用HE染色確定腫瘤標(biāo)本主要由腫瘤組織構(gòu)成，癌旁組織沒有腫瘤細(xì)胞浸潤。 (2)主要試劑：蛋白酶K(TaKaRa)，RNAiso試劑(Trizol，Takara)，SFRP4多克隆抗體(SANTA CRUZ)，RNAPCR試劑盒(AMV)3．O(TaKaRa)，GENMED

4、基因甲基化檢測試劑盒(杰美)，DAB顯色試劑盒，山羊抗小鼠IgG(3)主要儀器：PCR.儀(ABI-9700，美國)，低溫超速離心機(jī)(5810R，德國)，凝膠自動成像分析系統(tǒng)(PERSONALFX，美國)，紫外分光光度計(UVMINI-1204，日本)，深凍冰箱(-80℃，MDF-U32V，日本)，各種顯微鏡，勻漿器等。 2、方法采用免疫組織化學(xué)、RT-PCR及甲基化特異性PCR等方法對SFRP4在胰腺癌細(xì)胞CFPAC-1，PC

5、-3和PANC-1、36例原發(fā)性胰腺癌及相應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)情況及甲基化狀態(tài)進(jìn)行分析。采用Fisher's e xact檢驗對SFRP4異常表達(dá)與原發(fā)性胰腺癌患者臨床病理特征之間的相關(guān)性進(jìn)行分析。 結(jié)果: (1)胰腺癌細(xì)胞CFPAC-1和PANC-1存在SFRP4基因甲基化，而PC-3未檢出SFRP4基因甲基化。PC-3存在SFRP4 mRNA表達(dá)，而CFPAC-1和PANC-1未檢出表達(dá)。采用去甲基化試劑5-aza-2

6、'-deoxycytidine對CFPAC-1和PANC-1進(jìn)行處理后，SFRP4 mRNA重新出現(xiàn)表達(dá)。 (2)在36例原發(fā)性胰腺癌中，17例存在SFRP4.基因甲基化現(xiàn)象；在其相應(yīng)的癌旁組織中，5例檢出SFRP4甲基化，兩者差異顯著。15例原發(fā)性胰腺癌存在SFRP4表達(dá)消失；在其相應(yīng)的癌旁組織中，3例表達(dá)消失，兩者差異顯著。 (3)SFRP4表達(dá)消失與患者年齡、性別、腫瘤大小及分化程度均無相關(guān)性，而與SFRP4基因甲