手把區(qū)域多肽(HRP)及西格列汀對(duì)肥胖MSG大鼠胰島結(jié)構(gòu)及功能的影響.pdf

1、研究背景：
　　基礎(chǔ)及臨床研究提示腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)參與糖代謝的調(diào)節(jié)過(guò)程。(前)腎素受體(P)RR作為RAS新成員可在胰島局部表達(dá)。既往研究表明手把區(qū)域多肽(HRP)作為(P)RR抑制劑可阻斷(P)RR功能,從而改善心臟、腎臟等靶器官。近年發(fā)現(xiàn)RAS系統(tǒng)可通過(guò)多種通路對(duì)機(jī)體糖代謝產(chǎn)生影響,其中與GLP-1之間的關(guān)聯(lián)逐漸引起重視。DDP-Ⅳ抑制劑通過(guò)抑制體內(nèi)GLP-1降解而成為一種新型降糖藥與RAS阻斷劑有部分相似作用,

2、Leung等提出了機(jī)體中存在RAS-GLP-1-T2DM軸,并表明DDP-Ⅳ抑制劑與ARB在改善胰島β細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能上有協(xié)同作用。前腎素-腎素-(P)RR系統(tǒng)和RAS-GLP-1-T2DM軸是否共同參與糖代謝異常及胰島素抵抗的病理生理過(guò)程尚不明確。
　　目的：
　　本課題通過(guò)給予新生雌性SD大鼠左旋谷氨酸單鈉(MSG)皮下注射建立肥胖MSG大鼠模型,了解MSG大鼠糖代謝異常的特點(diǎn),探討單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用HRP和西格列汀對(duì)MSG大

3、鼠糖代謝的影響和MSG大鼠胰島結(jié)構(gòu)和功能的影響,并對(duì)糖代謝及胰島結(jié)構(gòu)變化的機(jī)制進(jìn)行初步探討。
　　材料與方法：
　　新生雌性SD大鼠出生后第2、4、6、8、10天皮下注射(MSG4g/kg),正常對(duì)照組(Con組)注射生理鹽水(0.5g/kg)。3周斷奶后,接受MSG干預(yù)的大鼠隨機(jī)分為MSG組、MSG+HRP干預(yù)組(MSG+HRP組)、MSG+西格列汀干預(yù)組(MSG+S組),MSG+HRP+西格列汀干預(yù)組(MSG+HRP+S

4、組),予以高脂飼料喂養(yǎng),而正常對(duì)照組則予飼喂基礎(chǔ)飼料。8周齡時(shí)開始對(duì)大鼠進(jìn)行干預(yù)。MSG+S組予西格列汀225PPM濃度(相當(dāng)于10mg/kg/d)溶于大鼠飲水中,MSG+HRP組及MSG+HRP+S組按照1mg/kg/d的劑量通過(guò)ALZET滲透泵持續(xù)皮下泵入HRP,干預(yù)時(shí)間為4周。干預(yù)結(jié)束時(shí)予以行OGTT、胰島素釋放試驗(yàn)及ITT而評(píng)估大鼠糖耐量、胰島β細(xì)胞功能及胰島素抵抗情況;測(cè)量大鼠的體重、體長(zhǎng),脂肪濕重了解大鼠肥胖情況;摘取動(dòng)物胰

5、島,制作組織切片,采用免疫組化法標(biāo)記胰島素和胰高血糖素陽(yáng)性細(xì)胞,計(jì)算β細(xì)胞和α細(xì)胞占胰島比例;采用免疫組化法測(cè)大鼠胰島NADPH氧化酶亞單位p22phox蛋白表達(dá),分別采用PCNA法和天狼猩紅染色檢測(cè)胰島細(xì)胞增殖及纖維化情況、TUNEL法檢測(cè)胰島細(xì)胞凋亡;ELISA法檢測(cè)胰島素及GLP-1水平。
　　結(jié)果：
　　1.動(dòng)物一般情況:與Con組相比較,MSG大鼠Lee’s指數(shù)、腹腔脂肪濕重及單位脂肪重量明顯增加,體長(zhǎng)減少(P<0

6、.05)。MSG+S組及MSG+S+HRP組單位脂肪重量較MSG組減輕(P<0.05)
　　2.OGTT結(jié)果:與CON組比較,MSG組OGTT血糖曲線下面積增加(P<0.05);MSG+HRP組、MSG+S組和MSG+HRP+S組較MSG組均有下降(P<0.05)。ITT結(jié)果提示MSG大鼠胰島素敏感性降低,西格列汀及HRP均可改善胰島素敏感性。胰島素釋放試驗(yàn)結(jié)果:與CON組對(duì)比,MSG組、MSG+HRP組、MSG+S組及MSG+S

7、+HRP組在0、30、60、120分鐘胰島素水平及AUCinsulin均明顯下降(p<0.01)。糖負(fù)荷后血清GLP-1水平:與CON組相比,MSG組大鼠在糖負(fù)荷后GLP-1水平及AUCGLP-1明顯降低(p<0.01);MSG+S組與MSG組相比AUCGLP-1升高(P<0.05)。
　　3.胰島β細(xì)胞和α細(xì)胞比例:與CON組β-mass對(duì)比,MSG組明顯下降(P<0.01);MSG+HRP組、MSG+S組及MSG+S+HRP組

8、的胰島β-mass較MSG組均明顯增加,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。與CON組α-mass對(duì)比,MSG+HRP組及MSG+S+HRP組的胰島α-mass均升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。
　　4.胰島細(xì)胞增殖及凋亡:與Con組對(duì)比,MSG組及MSG+HRP胰島中PCNA陽(yáng)性細(xì)胞個(gè)數(shù)明顯升高(P<0.05),陽(yáng)性細(xì)胞主要分布在胰島周邊部位;與MSG組相比,MSG+HRP組、MSG+S組及MSG+S+HRP組胰島中陽(yáng)

9、性細(xì)胞數(shù)無(wú)明顯差異(P>0.05)。各組間細(xì)胞凋亡無(wú)差異。
　　5.胰島氧化應(yīng)激:與Con組比較,MSG組p22phox表達(dá)明顯升高(P<0.01);與MSG組對(duì)比,,MSG+S組p22phox表達(dá)顯著下降(P<0.01),MSG+S+HRP組p22phox表達(dá)下調(diào)(P<0.05)。
　　6.胰島纖維化:與CON組相比,MSG組胰島中纖維條索明顯增加;MSG+HRP組、MSG+S組及MSG+S+HRP組胰島中著色的膠原纖維條

10、索較MSG組出現(xiàn)不同程度的減少。
　　結(jié)論：
　　MSG大鼠可作為胰島素抵抗伴胰島功能缺陷的動(dòng)物模型;HRP改善MSG大鼠胰島素敏感性,但未能改善葡萄糖刺激下的胰島素分泌和糖負(fù)荷后水平,HRP促進(jìn)胰島細(xì)胞增殖,以α細(xì)胞增殖為主,同時(shí)可抑制MSG大鼠胰島纖維化;西格列汀可改善MSG大鼠胰島敏感性,并增加糖負(fù)荷后胰島素分泌,升高胰島細(xì)胞β數(shù)量及比例,改善胰島局部氧化應(yīng)激及纖維化程度;聯(lián)合HRP及西格列汀后可以改善胰島素敏感性,增