自身免疫性疾病的遺傳易感性研究.pdf

1、自身免疫性疾病是世界上發(fā)病率和死亡率最高的病種之一。因?yàn)闄C(jī)體對(duì)自身抗原發(fā)生免疫應(yīng)答，許多無法治愈。好發(fā)于青壯年，給人類社會(huì)帶來了極大的痛苦和負(fù)擔(dān)。許多研究都已經(jīng)成功定位了這類復(fù)雜性狀疾病的易感區(qū)域。本研究在前期連鎖分析研究的基礎(chǔ)上，在強(qiáng)直性脊柱炎(AS)和Gralves’病(GD)的定位區(qū)域內(nèi)，選取候選基因進(jìn)行SNP篩查和相關(guān)性研究。我們的研究表明，LTA和TAP2基因獨(dú)立于HLA-B27與AS存在顯著的相關(guān)性，并將IL3定位為中國人群

2、GD的易感基因。 第一部分 目的：AS是一種慢性炎癥性關(guān)節(jié)病，主要累及骶髂關(guān)節(jié)和脊柱。遺傳度高達(dá)90％，我們前期的連鎖分析將其定位于D6S1691-D6S276-D6S1618，該區(qū)域與AS的相關(guān)性在各人群的連鎖分析中都得到了證實(shí)，包含眾多的MHC II和MHCIII類基因，都可能是潛在的易感基因。HLA-B27是AS最主要的易感基因，但具體病理機(jī)制仍未可知。本研究將在該區(qū)域內(nèi)探尋其他AS易感基因的存在。 方法：

3、在該區(qū)域內(nèi)選擇了4個(gè)屬于UPS(泛素蛋白酶系統(tǒng))通路的MHC II類基因(LMP2、LMP7、TAP1和TAP2)，以及2個(gè)TNF超家族的MHCIII類基因(LTA和TNF)。對(duì)這六個(gè)候選基因的啟動(dòng)子、外顯子和鄰近的內(nèi)含子區(qū)域在全部194例病例和475例對(duì)照樣本中都進(jìn)行了直接測(cè)序，并進(jìn)行了病例一對(duì)照關(guān)聯(lián)研究。 結(jié)果：在此區(qū)域內(nèi)一共發(fā)現(xiàn)了450個(gè)多態(tài)位點(diǎn)，其中158個(gè)MAF>1％。進(jìn)行相關(guān)性分析后發(fā)現(xiàn)，有40個(gè)位點(diǎn)具有顯著性。用最

4、嚴(yán)格的Bonferroni方法進(jìn)行多重檢驗(yàn)校正后，只有15個(gè)位點(diǎn)還具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。經(jīng)過進(jìn)一步HLA-B27分層分析后，確定了兩個(gè)與AS獨(dú)立相關(guān)的易感位點(diǎn)。分別是位于LTA基因啟動(dòng)子區(qū)域的rs915654和TAP2基因Intron_11的rs41316548。rs915654的T等位基因(Pcorrected=0.004)具有顯著的致病效應(yīng)(顯性模式：Pcorrected=0.006，OR=2.475，CI95％：1.593-3.845)

5、，在B27陽性樣本中依然具有顯著性(P=0.016)。rs41316548的A等位基因(Pcorrected=2.70E-05)具有顯著的致病效應(yīng)(顯性模式：Pcorrected=2.84 E-05，OR=3.618，CI95％=2.181-6.002)，在B27陽性樣本中依然具有顯著性(P=0.027)。 結(jié)論：LTA與TAP2基因多態(tài)存在獨(dú)立的AS相關(guān)性。LTA基因編碼的LT(淋巴細(xì)胞毒素)α對(duì)次級(jí)淋巴器官組織的發(fā)育和維護(hù)具

6、有關(guān)鍵作用，并通過TNF受體途徑傳導(dǎo)信號(hào)，導(dǎo)致多種炎癥性細(xì)胞因子和化學(xué)增活素的激活。LTs(LTα、LTβ)和TNF、LIGHT(LT-related inducible ligand，LT相關(guān)可誘導(dǎo)配基)共同組成信號(hào)網(wǎng)絡(luò)，對(duì)于先天性和獲得性免疫應(yīng)答都具有重要的調(diào)節(jié)作用，本研究首次確定了它與AS的相關(guān)性。TAP2基因編碼的產(chǎn)物屬于ATP依賴性轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，負(fù)責(zé)各種分子胞內(nèi)膜和胞外膜的轉(zhuǎn)運(yùn)，與多向性抗藥有關(guān)。TAP1和TAP2組成的異二聚體表

7、達(dá)于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜。負(fù)責(zé)將蛋白酶體水解產(chǎn)生的內(nèi)源性抗原肽轉(zhuǎn)運(yùn)至內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔，與HLA I類分子形成穩(wěn)定的復(fù)合物后才能提呈給T細(xì)胞，不同TAP分子具有不同的多肽親和力，在抗原選擇和MHC I類分子表面再生水平上亦有不同。 第二部分 目的：GD是常見的組織器官特異性自身免疫病，受遺傳背景和多種因素影響，最近的調(diào)查表明甲亢發(fā)病率為0.25～1.09％。此前，我們和日本人群的連鎖分析曾將東亞人群定位于5q31-33。本研究選用Tag SN

8、P研究該區(qū)域多態(tài)位點(diǎn)的相關(guān)性。 方法：共選擇了19個(gè)候選基因，包括6個(gè)甲狀腺特異表達(dá)基因，分別與凋亡(LARS、SPINK1)、轉(zhuǎn)錄(POU4F3、TCERG1、PPP2R2B)及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)DPYSL3、PPP2R2B有關(guān)。和13個(gè)免疫相關(guān)基因，依次是：IL3、SLC22A4、SLC22A5、IRF1、IL5、IL13、IL4、IL9、GCCR、HLA-HB1、ADRB2、IL12B和IL17B。通過測(cè)序(病例：24vs對(duì)照：24

9、)共發(fā)現(xiàn)了192個(gè)多態(tài)位點(diǎn)，選取了51個(gè)Tag SNPs分別采用來自上海(428例病例和1690例對(duì)照)和山東(68例病例和471例對(duì)照)的2組獨(dú)立樣本進(jìn)行基因分型和關(guān)聯(lián)研究，均屬中國漢族人群。 結(jié)果：用南方人群進(jìn)行Tag SNP篩查后發(fā)現(xiàn)IL3基因的非同義突變位點(diǎn)rs40401(P27S)與GD相關(guān)，對(duì)其所在的block進(jìn)行精細(xì)定位后，發(fā)現(xiàn)rs40401或與之完全連鎖的rs31480是造成這種相關(guān)性的真正信號(hào)位點(diǎn)，rs3148

10、0位于IL3基因5’端附近，P[allele]=0.03，隱性模式下具有顯著的致病效應(yīng)：OR=1.53，CI95％=1.6-2，P=0.002。用北方人群樣本進(jìn)行驗(yàn)證后在北方人群和聯(lián)合樣本中表現(xiàn)出更強(qiáng)的相關(guān)性。北方人群P[allele]=0.002，隱性模式：OR=1.76，CI95％=1.32-2.36，P=0001；聯(lián)合樣本P[allele]=0.0007，隱性模式：OR=1.63，CI95％=1.34-1.99，P=4E-06。