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1、目的:研究腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)對鼠視網(wǎng)膜M(u)ller細(xì)胞L-谷氨酸/L-天門冬氨酸轉(zhuǎn)運體(GLAST)的調(diào)控作用。 方法:(1)采用組織塊培養(yǎng)方法培養(yǎng)出生后3-7天的小鼠視網(wǎng)膜M(u)ller細(xì)胞。(2)實驗分組:①BDNF干預(yù)組:將不同濃度BDNF(50ng/ml,75 ng/ml,100 ng/ml,125 ng/ml及150 ng/ml)分別
2、加入鼠視網(wǎng)膜M(u)ller細(xì)胞中培養(yǎng)24小時;②對照組:M(u)ller細(xì)胞中不加BDNF。(3)采用逆轉(zhuǎn)錄.聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法分析M(u)ller細(xì)胞谷氨酸轉(zhuǎn)運體GLASTmRNA表達(dá)的差異。(4)采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色方法檢測M(u)ller細(xì)胞GLAST蛋白質(zhì)表達(dá)的差異。 結(jié)果:(1)不同濃度的BDNF均能上調(diào)谷氨酸轉(zhuǎn)運體GLASTmRNA的表達(dá),并且隨著BDNF濃度的增大,GLASTmRNA表達(dá)量增大,當(dāng)B
3、DNF濃度為100 ng/ml時進(jìn)入平臺期,GLASTmRNA表達(dá)量(灰度值:1.96±0.13)最大。(2)免疫細(xì)胞化學(xué)顯示GLAST蛋白定位于視網(wǎng)膜M(u)ller細(xì)胞胞漿和胞膜中。當(dāng)BDNF濃度為100ng/ml時,干預(yù)組M(u)ller細(xì)胞內(nèi)GLAST蛋白的表達(dá)量最大,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論:BDNF可上調(diào)GLASTmRNA和GLAST蛋白質(zhì)的表達(dá),對視網(wǎng)膜M(u)ller細(xì)胞谷氨酸轉(zhuǎn)運體GLAST具
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