新型膠原真皮支架的制備及其純度測(cè)定與性能檢測(cè).pdf

1、近年來皮膚組織工程的出現(xiàn)為改善創(chuàng)面修復(fù)質(zhì)量、解決皮源不足等問題提供了嶄新的思路和方法。其中，真皮支架作為細(xì)胞外基質(zhì)，為細(xì)胞提供了黏附、生長(zhǎng)、遷移、增殖和分化的環(huán)境，在人工皮膚的構(gòu)建中起著關(guān)鍵作用，一直是皮膚組織工程研究的重點(diǎn)。近年來，關(guān)于用豬的皮膚制備脫細(xì)胞真皮基質(zhì)作為真皮支架用于構(gòu)建人工皮膚已成為研究的熱點(diǎn)。但由于制備思路的局限與制備工藝的不足，目前脫細(xì)胞真皮基質(zhì)存在著免疫原性強(qiáng)、滲透性差、生物活性低等缺點(diǎn)。本文以組織工程學(xué)原理為指導(dǎo)

2、，在前期研究的基礎(chǔ)上以及綜合考慮理想真皮支架的要求，采用新的制備工藝和多種化學(xué)、生物與物理綜合方法強(qiáng)化處理乳豬皮，制備一種不同于現(xiàn)有ADM、具有天然三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的新型膠原真皮支架，重點(diǎn)研究了戊二醛交聯(lián)與堿膨脹的次序、戊二醛用量、酶用量與酶處理時(shí)間對(duì)支架材料理化性能的影響，優(yōu)化了關(guān)鍵制備工藝和膠原純度的測(cè)定方法，并對(duì)其主要性能進(jìn)行檢測(cè)。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下： (1)研究了戊二醛交聯(lián)與堿膨脹的次序、戊二醛用量、酶用量和處理時(shí)間對(duì)支

3、架材料理化性能的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：先交聯(lián)保護(hù)、后堿膨脹的支架材料的孔隙率和透水汽性能要高于先堿膨脹、后交聯(lián)的支架材料，故本實(shí)驗(yàn)選定先交聯(lián)、后堿膨脹；隨著戊二醛用量的增加，支架材料拉伸強(qiáng)度和收縮溫度明顯升高，體外降解時(shí)間明顯延長(zhǎng)，而孔隙率、透水汽性能和親水性隨著戊二醛用量的增加有所降低，但降低的幅度都不是很大；隨著酶用量的增大及作用時(shí)間的延長(zhǎng)，支架材料的孔隙率提高，透水汽性增強(qiáng)。 (2)采用比色法測(cè)定新型膠原真皮支架中的膠原含量

4、，并對(duì)其水解工藝條件進(jìn)行優(yōu)化，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：新型膠原真皮支架最佳水解條件為每50mg干燥樣品加入6mol/L鹽酸10mL，100℃水解32h；此方法操作簡(jiǎn)單，測(cè)得結(jié)果的變異系數(shù)為0.3759％，說明具有較好的重現(xiàn)性；新型膠原真皮支架的膠原含量均高達(dá)90％以上，高于軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院裝備研究所制備的膠原海綿支架(約74％)，說明本實(shí)驗(yàn)制備的真皮支架中的表皮、脂肪和纖維間質(zhì)等非膠原成分去除得比較徹底。 (3)以組織工程原理為指導(dǎo)，依據(jù)(

5、1)、(2)的研究結(jié)果，結(jié)合現(xiàn)有材料的優(yōu)點(diǎn)以及理想真皮支架材料的要求，制備出一種不同于現(xiàn)有ADM、具有天然真皮三維網(wǎng)絡(luò)多孔結(jié)構(gòu)的新型膠原支架，對(duì)其主要性能進(jìn)行檢測(cè)。研究結(jié)果顯示：新型膠原真皮支架呈乳白色，表面平整光滑，無肉眼可見的雜物和變色，經(jīng)戊二醛交聯(lián)后，其質(zhì)地明顯變韌，顏色變黃；光鏡檢測(cè)結(jié)果顯示真皮內(nèi)的細(xì)胞成分已被去除掉，膠原纖維束保存完好；SEM觀察結(jié)果顯示支架材料的表面有大小不同的孔分布，且與支架內(nèi)部相通，纖維束保持了其原有的天

6、然三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)并得到了適當(dāng)?shù)乃缮ⅲЪ軆?nèi)部具有豐富的多孔結(jié)構(gòu)；其pH值在6.5～7.5范圍內(nèi)，符合人體液pH值范圍；其孔隙率為70％左右，具有良好的孔隙率；其透水汽性能為2900g·m-2·24h-1左右，適合創(chuàng)面恢復(fù)；其拉伸強(qiáng)度介于10.15～11.56MPa之間，完全滿足臨床移植的要求；體外降解時(shí)間處于15～70h之間，并可根據(jù)需要采用交聯(lián)劑進(jìn)行調(diào)整，從而滿足不同支架材料降解速率的要求；MTT法測(cè)定其細(xì)胞毒性為1級(jí)，符合植入人體生物