RNAi阻斷CDK2基因表達對RB基因表達的影響及樹舌多糖GF輔助作用的研究.pdf

1、目的：通過將已構(gòu)建成功的針對CDK2基因的siRNA真核表達載體,轉(zhuǎn)染至人肝癌細胞株SMMC7721中,研究其對細胞周期調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中RB基因表達的影響,以及中藥樹舌多糖GF對其的輔助作用。 方法：將已構(gòu)建成功的針對CDK2基因的siRNA真核表達載體通過陽離子脂質(zhì)體試劑法轉(zhuǎn)染肝癌細胞株SMMC7721,利用實時熒光定量PCR技術(shù)研究RNAi抑制CDK2基因后對細胞周期調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中相關(guān)基因RB的mRNA水平的影響:MTT法檢測樹舌多糖

2、GF體外對SMMC7721細胞增殖抑制情況并篩選出體外抗瘤的有效樹舌多糖GF劑量；并采用熒光定量PCR技術(shù)研究樹舌多糖對肝癌SMMC7721細胞中RB基因表達的影響并探討該多糖對其的輔助作用。 結(jié)果： 1.樹舌多糖GF2.5μg·mL-1、5μg·mL-1、10μg·mL-1對肝癌細胞增殖有明顯抑制作用,抑制率分別為20.01％、20.47％、24.44％。 2.樹舌多糖GF2.5μg·mL-1、10μg·mL-

3、1可使RB基因mRNA表達水平上調(diào)。與SMMC7721相比,樹舌多糖GF2.5μg·mL-1組與樹舌多糖GF10μg·mL-1組RB基因mRNA水平分別上調(diào)63％、64％。 3.RNAi抑制CDK2基因表達后對RB基因mRNA表達有影響,siRNA190組中RB基因上調(diào)56％,siRNA191組中RB基因的mRNA表達上調(diào)11％。 4.與單純siRNA191組相比,樹舌多糖GF2.5μg·mL-1、10μg·mL-1與s

4、iRNA191組合用可分別使肝癌細胞中RB基因mRNA水平上調(diào)5％、4％;與單純siRNA190組相比,樹舌多糖GF2.5μg·mL-1、10μg·mL-1與siRNA190組合用均未能使肝癌細胞中RB基因mRNA水平上調(diào)。 結(jié)論： 1.肝癌SMMC7721細胞的過度增殖與RB基因缺失性表達關(guān)系密切。 2.樹舌多糖GF對體外肝癌細胞株SMMC7721的增殖有明顯抑制作用,其機制可能是通過上調(diào)RB基因表達實現(xiàn)的。