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1、該研究首先從HCV基因組中擴(kuò)增出ns5b基因,構(gòu)建了ns5b基因與報(bào)告分子EGFP(增強(qiáng)型綠色熒光蛋白)基因的融合基因真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFPN3-ns5b;通過(guò)含有不同G418濃度梯度的培養(yǎng)液培養(yǎng)HepG2細(xì)胞,確定了篩選用G418工作濃度為800μg/ml;利用脂質(zhì)體法將該重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞,經(jīng)過(guò)有限稀釋法和G418壓力選擇,應(yīng)用熒光顯微鏡和RT-PCR檢測(cè),獲得可穩(wěn)定表達(dá)NS5B-EGFP融合蛋白的HepG2細(xì)胞克隆.然后根
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