樹舌多糖GF輔助RNAi抑制肝癌細(xì)胞CDK2基因表達(dá)的研究.pdf

1、目的：研究樹舌多糖GF對(duì)SMMC7721肝癌細(xì)胞中細(xì)胞周期調(diào)控因子CDK2基因表達(dá)的影響：以及其對(duì)RNAi抑制CDK2基因表達(dá)的輔助作用,進(jìn)一步探明樹舌多糖抗腫瘤的機(jī)理,同時(shí)也為腫瘤的基因治療提供一個(gè)新的技術(shù)平臺(tái)和先進(jìn)方法。 方法:MTT法檢測(cè)中藥樹舌多糖GF體外對(duì)SMMC7721肝癌細(xì)胞增殖抑制情況并篩選出抗瘤的有效樹舌多糖劑量；采用基因重組技術(shù)構(gòu)建CDK2基因的siRNA真核表達(dá)載體,陽離子脂質(zhì)體試劑法轉(zhuǎn)染SMMC7721肝

2、癌細(xì)胞；采用熒光定量PCR與Western blotting方法研究樹舌多糖對(duì)肝癌SMMC7721細(xì)胞CDK2基因表達(dá)的影響并探討其對(duì)RNAi沉默CDK2基因表達(dá)的輔助作用。 結(jié)果： 1.樹舌多糖GF 2.5μg·mL-1、5μg·mL-1和10μg·mL-1劑量對(duì)體外SMMC7721肝癌細(xì)胞增殖有抑制作用,抑制率分別為20.01％、20.47％和24.44％。 2.與SMMC7721肝癌細(xì)胞組相比,樹舌多糖GF

3、2.5μg·mL-1、5μg·mL-1和10μg·mL-1組可以使CDK2基因mRNA表達(dá)水平分別降低45％、40％和42％；樹舌多糖GF2.5μg·mL-1和GF10μg·mL-1組可以使CDK2基因蛋白表達(dá)水平分別下降53.9％和18.0％。 3.成功構(gòu)建以CDK2基因?yàn)榘悬c(diǎn)的siRNA190和siRNA191真核表達(dá)載體,并轉(zhuǎn)染入肝癌細(xì)胞,轉(zhuǎn)染效率在90％以上。 4.樹舌多糖GF10μg·mL-1使siRNA190

4、抑制CDK2蛋白水平提高47.1％；GF2.5μg·mL-1使siRNA191抑制CDK2 mRNA和蛋白水平分別提高3％和13.3％。 結(jié)論： 1.樹舌多糖GF對(duì)體外SMMC7721肝癌細(xì)胞的增殖有一定的抑制作用,機(jī)制可能是通過下調(diào)CDK2基因表達(dá)實(shí)現(xiàn)的。 2.成功構(gòu)建以CDK2基因?yàn)榘悬c(diǎn)的siRNA真核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染入SMMC7721肝癌細(xì)胞中可以特異地沉默CDK2基因表達(dá),表明CDK2基因可能成為肝癌基因治