刺參酸性粘多糖對肝腫瘤HepG2細胞增殖及相關基因表達的影響.pdf

1、目的:研究刺參酸性粘多糖（SJAMP）對人肝腫瘤HepG2細胞增殖的抑制作用，探討其對HepG2細胞增殖有關的基因和蛋白表達的影響，為揭示刺參酸性粘多糖抗肝腫瘤作用提供依據(jù)。
　　 方法:人肝腫瘤HepG2細胞常規(guī)培養(yǎng)于含10％胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基，人正常肝細胞張氏細胞常規(guī)培養(yǎng)于含10％胎牛血清的PRMI-1640培養(yǎng)基，兩種細胞置于37℃、含0.05％（體積分數(shù)）CO2的細胞培養(yǎng)箱中。取對數(shù)生長期的細胞，培養(yǎng)基中加入刺

2、參酸性粘多糖進行干預，濃度依次為0、0.5、2.0、8.0μg/ml。干預一定時間后，透射電鏡觀察細胞結構的變化，MTT實驗觀察刺參酸性粘多糖對細胞增殖的影響，流式細胞術檢測細胞周期，免疫細胞化學法檢測增殖細胞核抗原(PCNA)、P21、P53、MDM2、pRb、E2F-1、cyclinD1、CDK4蛋白的表達，實時熒光定量PCR(Real-timePCR, RT-PCR)檢測P53、MDM2、、pRb、E2F-1、cyclinD1、C

3、DK4 mRNA的表達。
　　 結果:透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，SJAMP干預后的HepG2細胞內(nèi)部形態(tài)發(fā)生改變并見細胞脫落狀凋亡;MTT實驗結果表明SJAMP能夠抑制HepG2細胞增殖，且隨著干預劑量（0、0.5、2.0、8μg/ml）增加和干預時間(12h、24h、48h)延長抑制作用增強(P＜0.05)，SJAMP對張氏細胞增殖沒有顯著的抑制作用(P＞0.05)。流式細胞術檢測細胞周期結果顯示，SJAMP使HepG2細胞細胞周期發(fā)

4、生G1期停滯，且隨著SJAMP干預劑量的增加，HepG2細胞停留在G1期的細胞增加，G2期和S期的細胞相應減少，差別有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），SJAMP干預后張氏細胞細胞周期未發(fā)生顯著改變（P＞0.05）。免疫細胞化學檢測結果表明，隨著SJAMP作用劑量的增加，HepG2細胞PCNA的表達降低，P21蛋白表達升高，各組差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），張氏細胞PCNA和P21蛋白表達隨著SJAMP干預劑量的變化未發(fā)生顯著改變(P＞0

5、.05)。RT-PCR檢測結果顯示，隨著SJAMP作用劑量的增加，HepG2細胞P53、MDM2、E2F-1、cyclinD1以及CDK4 mRNA的表達均降低，pRb mRNA的表達增加，差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，各組張氏細胞上述指標mRNA的表達未發(fā)生顯著改變(P＞0.05)。免疫細胞化學檢測結果顯示，SJAMP干預后，HepG2細胞P53、MDM2、E2F-1、cyclinD1以及CDK4蛋白的表達降低，pRb蛋白的表達升

6、高，且隨著SJAMP干預劑量的增加而變化，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，各組張氏細胞各蛋白表達未發(fā)生顯著變化(P＞0.05)。
　　 結論:刺參酸性粘多糖能夠抑制人肝腫瘤HepG2細胞的增殖，其機制可能為SJAMP通過抑制PCNA、抑癌基因P53及其蛋白、癌基因MDM2及其蛋白的表達以及作用于細胞周期G1期的Rb-E2F通路，抑制其E2F-1、cyclinD1、CDK4基因及蛋白的表達，促進pRb和P21基因及蛋白的表達，使