血液透析方式及透析膜對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的影響及藥物干預(yù)的研究.pdf

1、目的：了解不同血液透析方式及透析膜患者血清對(duì)體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）活力、細(xì)胞間粘附分子（ICAM—1）、一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）的變化及還原型谷胱甘肽（GSH）的影響。探討不同血液透析方式及采用的透析膜對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響，為選擇適當(dāng)透析方式及透析膜，防治心血管并發(fā)癥提供理論依據(jù)。 方法：選取山東大學(xué)附屬濟(jì)南市中心醫(yī)院血液凈化中心符合入選標(biāo)準(zhǔn)的維持性血液透析患者30例為實(shí)驗(yàn)

2、組，以本院健康志愿者15例為正常血清對(duì)照組，按透析方式和膜不同及是否應(yīng)用還原型谷胱甘肽分為6組，每組5例。體外培養(yǎng)HUVEC，加入10%不同透析方式及透析膜患者的血清分別共孵育3小時(shí)，6小時(shí)，12小時(shí)。本實(shí)驗(yàn)分為正常人血清對(duì)照組（正常人血清），實(shí)驗(yàn)組（醋酸纖維膜（CA）血液透析（HD）組，聚砜膜（PS）HD組，聚砜膜（PS）血液透析濾過（HDF）組，HD+CA+GSH組，HD+PS+GSH組，HDF+GSH組）透析前后血清。觀察各組HU

3、VEC在3小時(shí)，6小時(shí)，12小時(shí)的變化，MTT法測(cè)定各組HUVEC的活力，流式細(xì)胞儀測(cè)定HUVEC在3小時(shí)，6小時(shí)，12小時(shí)細(xì)胞表面ICAM—1的變化，ELISA法分別測(cè)定HUVEC培養(yǎng)上清液3小時(shí)，6小時(shí)，12小時(shí)NO，MDA，SOD的變化。 結(jié)果： 1.對(duì)細(xì)胞活力的影響：不同透析方式和透析膜患者血清分別刺激HUVEC18小時(shí)，24小時(shí)后，細(xì)胞生長(zhǎng)出現(xiàn)抑制，并且隨著時(shí)間的延長(zhǎng)抑制作用越明顯；A組對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制顯著。各

4、組患者血清與HUVEC共孵育12小時(shí)，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)與繁殖均無影響（與對(duì)照組比較P>0.05）；與HUVEC共孵育18小時(shí)和24小時(shí)，A組與對(duì)照組比較差異有顯著性（P<0.05）；實(shí)驗(yàn)組間比較差異有顯著性（P<0.05）。因此在下面的實(shí)驗(yàn)中選擇血清刺激HUVEC6小時(shí)和12小時(shí)，以保證血清對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖無影響。 2.不同透析方式及透析膜透析前后內(nèi)皮細(xì)胞ICAM—1的影響 各組血清與HUVEC共同作用3小時(shí)后，透析前ICAM—

5、1的表達(dá)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），各實(shí)驗(yàn)組間比較差異無顯著性；透析后A組與B組比較ICAM—1表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），同一種透析膜B組與C組比較ICAM—1的表達(dá)差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），透析中應(yīng)用GSH后D，E，F(xiàn)組透析前后ICAM—1的表達(dá)均較未用GSH組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；未用GSH組各組透析前后比較差異無顯著性。作用6小時(shí)后，A，B，C組ICAM—1的表達(dá)與

6、3小時(shí)比較明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，D，E，F(xiàn)組ICAM—1的表達(dá)顯著降低；作用12小時(shí)A，B，C組透析前后比較ICAM—1的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，D，E，F(xiàn)組透析后ICAM—1較透析前降低，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。 3.HUVEC培養(yǎng)上清液NO，MDA，SOD的檢測(cè)結(jié)果 各組血清與HUVEC共同作用3小時(shí)，透析前實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較NO，SOD均降低，MDA升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），各實(shí)驗(yàn)組間比較

7、差異無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；透析后A組與B組，C組與D組比較NO，SOD降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），C組較D組MDA升高無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；各組透析前后比較，未用GSH組透析前后差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，應(yīng)用GSH組透析后NO，SOD有所升高，MDA降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。作用6小時(shí)后，透析前實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較NO，SOD均降低MDA升高有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），透析后CA+HD組與PS+HD組，PS+HD組與HDF組比較N

8、O，SOD降低MDA升高有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），應(yīng)用GSH組透析后NO，SOD有所升高，MDA降低，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。12小時(shí)透析前實(shí)驗(yàn)各組與對(duì)照組比較NO，MDA，SOD差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，D，E，F(xiàn)組透析后較透析前NO增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，D組增加顯著；D，E，F(xiàn)組各組透析后較透析前MDA降低差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；D，E，F(xiàn)組透析后較透析前SOD升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： 1.ES

9、RD接受規(guī)律MHD患者心血管疾病（CVD）發(fā)生率比正常人群明顯增高，動(dòng)脈粥樣硬化（AS）是CVD發(fā)生的基礎(chǔ)，內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙已被證明是AS最早期的改變。同一透析方式不同透析膜比較，聚砜膜對(duì)HUVEC的損傷較醋酸纖維膜輕，同一透析膜不同透析方式比較，血液透析濾過對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的損傷輕。內(nèi)皮細(xì)胞的損傷程度與選擇的透析膜及透析方式有相關(guān)性。 2.透析過程中應(yīng)用還原型谷胱甘肽（GSH），可減輕內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，并隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，這種作用越明顯