探討miR-200b在舌鱗癌細(xì)胞中的表達(dá)和對增殖與侵襲的影響.pdf

1、【目的】：
　　本研究旨在探討miR-200b在人舌鱗癌組織和細(xì)胞中的表達(dá)與臨床意義以及生物學(xué)意義。
　　【方法】：
　　培養(yǎng)正常舌粘膜上皮細(xì)胞株（TEC）為對照組（A組），不同舌鱗癌細(xì)胞株 SCC-9、SCC-2、TSCCa、Tca8113分為 B、C、D、E組，作為實(shí)驗(yàn)組，運(yùn)用實(shí)時熒光定量 PCR檢測不同舌鱗癌細(xì)胞株與正常舌粘膜上皮細(xì)胞株中miR-200b的表達(dá)。收集62例舌鱗癌組織與癌旁正常組織，其中癌旁正常組織

2、作為對照組（A1組），舌鱗癌組織為實(shí)驗(yàn)組（B1組），運(yùn)用實(shí)時熒光定量PCR檢測62例舌鱗癌組織與癌旁正常組織中miR-200b的表達(dá)，并分析miR-200b的表達(dá)變化與舌鱗癌患者臨床病理資料的相關(guān)性。運(yùn)用轉(zhuǎn)染技術(shù)將scramble、control-siRNA、miR-200b mimics、Bmi-1-siRNA分別轉(zhuǎn)染于舌鱗癌Tca8113細(xì)胞分成A2、A3、B2、B3四組，其中scramble組（A2組）與miR-200b mimi

3、cs組（B2組），control-siRNA組（A3組）與 Bmi-1-siRNA組（B3組）分別配對，A2、A3為對照組，B2、B3為實(shí)驗(yàn)組。采用Western blot和qRT-PCR檢測miR-200b對Bmi-1基因的蛋白和mRNA表達(dá)變化。采用MTT法檢測miR-200b與Bmi-1-siRNA對舌鱗癌Tca8113細(xì)胞增殖的影響。采用 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測 miR-200b與 Bmi-1-siRNA 對舌

4、鱗癌Tca8113細(xì)胞侵襲的影響。
　　【結(jié)果】：
　　1.qRT-PCR結(jié)果顯示，與A組比較，B、C、D、E組miR-200b的表達(dá)均降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P<0.05）。與 A1組比較， B1組miR-200b的表達(dá)亦降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。相關(guān)性分析顯示，在62例舌鱗癌組織中，miR-200b的表達(dá)水平與患者的臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)。
　　2.Western blot與qRT-PCR

5、結(jié)果顯示，與A2、A3組比較，B2、B3組均能明顯下調(diào)舌鱗癌Tca8113細(xì)胞中Bmi-1的蛋白與mRNA表達(dá)水平，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　3.MTT結(jié)果顯示，與A2、A3組比較，B2、B3組OD值均明顯減小，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　4.Transwell結(jié)果顯示，與 A2、A3組比較，B2、B3組穿過基質(zhì)膠的Tca8113細(xì)胞數(shù)明顯降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　【