人類Pin1在食管癌組織中的表達.pdf

1、蛋白質(zhì)激酶Ser/Thr—Pro保守序列中Ser/Thr的可逆磷酸化，是細胞各種生命活動的重要信號調(diào)控機制，其失調(diào)將導(dǎo)致各種人類疾病的發(fā)生。Pinl是人類高度保守的特異性磷酸化肽基脯氨酰異構(gòu)酶，它作用于脯氨酸所形成的肽鍵，并且僅使磷酸化pSer/Thr—Pro發(fā)生異構(gòu)化，即由順式變?yōu)榉词?，從而影響底物蛋白的功能。這一磷酸化后調(diào)控機制能誘導(dǎo)磷酸蛋白的構(gòu)像變化，使其發(fā)揮功能。近來的研究顯示這種新的調(diào)控機制在許多生理過程中起重要的調(diào)節(jié)作用，一

2、旦失調(diào)便導(dǎo)致一系列人類疾病。如癌癥病人體內(nèi)Pinl表達異常增高，并調(diào)控多種癌基因的信號通路；而在神經(jīng)退行性AD病人體內(nèi)Pinl的表達量卻明顯下調(diào)，同時，Pinl缺失轉(zhuǎn)基因鼠表現(xiàn)出與年齡相關(guān)的神經(jīng)退化 本文構(gòu)建了pET42a+/Pinl質(zhì)粒和pET28b+/Pinl質(zhì)粒，尋找利用不同載體，在大腸桿菌中大量表達Pinl蛋白的最佳條件。進而通過各種不同的分離純化方案，尋找最佳的蛋白分離純化條件。將純化出來的蛋白免疫小鼠，制備多克隆抗血

3、清，得到效價較高的多克隆抗血清。并且利用免疫組織化學方法檢測食管癌組織和正常食管組織中Pinl蛋白在翻譯水平的表達差異；用實時定量PCR方法檢測食管癌組織和正常食管組織中mRNA水平上的表達差異。 結(jié)果顯示，在蛋白質(zhì)水平上，Pinl的表達在正常/癌兩種不同的食管組織中，表達量存在著顯著差異；而在mRNA水平上，Pinl的表達量在正常/癌兩種不同的食管組織中，沒有顯著差異。這表明了Pinl在食管癌組織中的表達，可能是在翻譯水平受到