顱咽管瘤炎癥與細胞增殖性的相關(guān)研究.pdf

1、目的：顱咽管瘤是顱內(nèi)上皮腫瘤之一，按世界衛(wèi)生組織劃分屬于Ⅰ級腫瘤，一般將其分為造釉細胞型顱咽管瘤和鱗狀乳頭型顱咽管瘤兩種病理類型。顱咽管瘤好發(fā)于鞍區(qū)，常見于兒童，占全年齡組顱內(nèi)腫瘤的4.7％～6.9％，占兒童顱內(nèi)腫瘤的1.2％-4.0％，而在兒童鞍區(qū)腫瘤中，顱咽管瘤約占50％左右。盡管顱咽管瘤在組織病理學上屬良性腫瘤，但是由于它與周圍重要的神經(jīng)血管組織的緊密粘連以及術(shù)后易復發(fā)、術(shù)后嚴重的并發(fā)癥等特點，所以臨床行為具有惡性特點。大量臨床資

2、料表明顱咽管瘤常常與視神經(jīng)、視交叉、垂體柄、下丘腦、顱底動脈環(huán)等周圍重要神經(jīng)血管結(jié)構(gòu)緊密粘連，手術(shù)剝離非常困難，稍有不慎可能會造成嚴重的后果。我們前期研究發(fā)現(xiàn)顱咽管瘤存在復雜的炎癥反應，顱咽管瘤與周圍結(jié)構(gòu)的緊密粘連、大量鈣化、囊液形成與炎癥密切相關(guān)，許多與與炎癥過程密切相關(guān)的因子如CD45、NF-□B、ICAM-1、OPN等在顱咽管瘤中表達，造釉細胞型顱咽管瘤炎癥反應比鱗狀乳頭型顱咽管瘤嚴重。α-干擾素(Interferon-α，IFN

3、-α)、轉(zhuǎn)化生長因子-β1（The transforminggrowth factorβ，TGF-β1）是與炎癥相關(guān)的細胞因子，在炎癥過程中有重要作用，并可以通過調(diào)節(jié)細胞周期、腫瘤細胞凋亡、血管生成等機制調(diào)控腫瘤細胞的生長增殖，在多種腫瘤細胞均有表達。IFN-α在炎癥過程中起促進作用，很多研究證實其與NF-κ B、OPN關(guān)系密切。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中IFN-α能夠通過經(jīng)典的JAK-STAT信號通路誘導一氧化氮合酶/一氧化氮的合成，并抑制具有

4、抗炎癥作用的血紅素氧合酶-1(HO-1)合成以促進炎癥。TGF-β1則具有炎癥抑制作用，可拮抗淋巴細胞的反應，通過調(diào)控和抑制T淋巴細胞、B淋巴細胞的增殖而阻礙Th2細胞功能和細胞因子的生成，控制炎癥反應的程度。小鼠敲除TGF-β1基因后單核細胞大量滲入全身多器官，出現(xiàn)嚴重炎性癥狀導致死亡;TGF-β1抑制中性粒細胞和T細胞與血管內(nèi)皮細胞的粘附，限制炎性細胞的滲出;TGF-β1還能抑制IL-1、IL-6、TNF-α和IFN-γ等炎癥因子的

5、產(chǎn)生。除了在炎癥方面的作用，IFN-α具有抗細胞增殖、促進凋亡、抑制腫瘤血管形成和免疫調(diào)節(jié)等多種生物學功能，能明顯的抑制腫瘤生長，已用于多種腫瘤的治療，但其抗腫瘤機制還未完全明確。IFN-α可能一方面直接作用于腫瘤細胞，抑制原癌基因，誘導抑癌基因的表達，抑制腫瘤細胞增殖。另一方面則通過調(diào)節(jié)機體免疫，激活包括巨噬細胞、NK細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞、Th1、樹突狀細胞(DCS)等多種免疫細胞攻擊腫瘤細胞，使機體產(chǎn)生保護性免疫機制

6、抑制腫瘤增殖。另外IFN-α還有很強的抗血管形成作用，抑制內(nèi)皮生長因子VEGF，抑制腫瘤血管的生成，進而抑制腫瘤的生長。大量文獻表明，通過顱咽管瘤囊內(nèi)或全身注射IFN-α，可以減小顱咽管瘤囊液量，顱咽管瘤體積明顯減小甚至消失，說明IFN-α可以調(diào)節(jié)顱咽管瘤細胞的增殖，并可能與顱咽管瘤囊液形成等生物學特性存在聯(lián)系，但未區(qū)分不同病理類型的顱咽管瘤，而且其具體的機制尚不明確。TGF-β1是一種多功能的多肽類因子，廣泛參與多種疾病如腫瘤及器官纖

7、維化的發(fā)生和發(fā)展。目前認為，在腫瘤早期階段TGF-β1可以抑制腫瘤生長，但腫瘤晚期TGF-β1卻促進細胞的增殖擴散及侵襲能力，幫助腫瘤細胞逃避免疫反應。Fas為腫瘤壞死因子受體超家族的重要成員之一，是一種細胞表面受體，當Fas/FasL結(jié)合后可以激活caspase-3，誘發(fā)表達Fas細胞凋亡。多種腫瘤細胞表面均有Fas表達，F(xiàn)as表達升高，可以增強機體免疫系統(tǒng)對腫瘤細胞的清除，促進腫瘤細胞的凋亡。Ierardi等通過往顱咽管瘤囊內(nèi)注射I

8、FN-α，發(fā)現(xiàn)腫瘤體積明顯減小，可能與IFN-α誘導Fas介導的細胞凋亡有關(guān)。同時有大量文獻報道TGF-β1也可以調(diào)節(jié)Fas/FasL在腫瘤的表達。本研究旨通過檢測顱咽管瘤中IFN-α、TGF-β1、Fas的表達，研究其與顱咽管瘤炎癥的關(guān)系，探討IFN-α、TGF-β1在顱咽管瘤炎癥的作用，以及其在調(diào)節(jié)腫瘤增殖中的作用及機制，探討炎癥與細胞增殖的關(guān)系，是否可以在臨床手術(shù)治療顱咽管瘤前或腫瘤切除術(shù)后進行干預，從而降低手術(shù)難度、提高腫瘤全切

9、率、減少顱咽管瘤的復發(fā)、避免術(shù)后進行放療。因此，研究IFN-α、TGF-β1Fas在顱咽管瘤中的表達及作用機制具有重要的臨床意義。
　　 方法：⑴以2010年5月～2012年5月在我科進行首次手術(shù)治療的顱咽管瘤病人為研究對象。入選患者共58例，其中男42例，女16例，年齡2～61歲，平均年齡31.0±18.9歲。病例納入標準:①研究期間所有在我科進行手術(shù)治療的顱咽管瘤患者，病歷記錄完整，有完整的術(shù)前影像檢查資料;②術(shù)后病理證實為

10、顱咽管瘤;③術(shù)前進行過放化療的除外。⑵本研究分兩部分:一，收集顱咽管瘤標本，探討IFN-α、TGF-β1與顱咽管瘤炎癥的關(guān)系及與鈣化、囊液形成等生物學特性的關(guān)系:1、運用HE染色法檢測顱咽管瘤炎癥情況;2運用免疫組織化學、Western Blot檢測腫瘤組織中IFN-α、TGF-β1的表達。二，探討炎癥與顱咽管瘤細胞增殖的關(guān)系:運用免疫組織化學、Western Blot檢測腫瘤組織中Fas的表達。⑶采用SPSS13.0對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分

11、析。不同類型顱咽管瘤之間的各檢測指標陽性表達率比較采用Mann-Whitney U檢驗。兩指標之間行Spearman相關(guān)分析，以P≤0.05為差異有顯著性。
　　 結(jié)果：①根據(jù)WH02007年神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤病理組織學分型標準對58例術(shù)后顱咽管瘤病理組織進行常規(guī)HE染色分型，將其分為兩種類型:成釉細胞型44例，鱗狀細胞型14例。顱咽管瘤組織中可見血管分布，大量的炎性細胞如噬中性粒細胞等游離滲出血管，在腫瘤組織中可見大量炎性細胞的浸潤

12、。造釉細胞型顱咽管瘤中可見鈣化等退行性改變，鈣化周圍有大量的炎性細胞的聚集。而鱗狀乳頭型顱咽管瘤則以實性細胞為主，未見鈣化、囊液形成等退行性改變。②免疫組化顯示IFN-α在顱咽管瘤細胞核廣泛表達，呈現(xiàn)棕黃色顆粒。造釉細胞型顱咽管瘤大部分細胞核中有IFN-α表達，44例標本中有40例表達陽性，IFN-α陽性率為90.91％，鱗狀乳頭型顱咽管瘤IFN-α在部分細胞核中表達，在14例標本中有12表達陽性，造釉細胞細胞型顱咽管瘤IFN-α陽性表

13、達率高于鱗狀乳頭型顱咽管瘤(Z=-2.003，p＜0.05)。復發(fā)顱咽管瘤IFN-α陽性表達率高于初發(fā)組(Z=-2.085，p＜0.05)。③TGF-β1在鱗狀乳頭型顱咽管瘤細胞膜表達最為明顯，而在造釉細胞細胞型顱咽管瘤僅有少量表達(Z=-2.129，p＜0.05)。復發(fā)顱咽管瘤亦僅有少量表達，初發(fā)顱咽管瘤較復發(fā)顱咽管瘤的表達明顯（Z=-2.685，P＜0.05）。經(jīng)Spearman秩相關(guān)分析，在全部顱咽管瘤中，IFN-α的表達程度與T

14、GF-β1呈負相關(guān)（rs=-0.273，p＜0.05）。④Western Blot結(jié)果發(fā)現(xiàn)鱗狀細胞型顱咽管瘤的IFN-α蛋白表達量低于造釉細胞型顱咽管瘤的表達量;而TGF-β1則在鱗狀細胞型顱咽管瘤表達比較明顯，高于成釉細胞型顱咽管瘤TGF-β1的表達量。④Fas在造釉細胞型顱咽管瘤中表達最為明顯，主要是在細胞胞膜及細胞漿中;而在鱗狀細胞型顱咽管瘤表達量少，。經(jīng)Mann-Whitney U檢驗分析，F(xiàn)as表達在造釉細胞型與鱗狀細胞型之間

15、差異具有統(tǒng)計學意義(Z=-5.142，P＜0.05)。經(jīng)Spearman秩相關(guān)分析，隨著IFN-α表達的增加，F(xiàn)as表達程度顯著增強（rs=0.328，P＜0.05）。而Fas表達程度與TGF-β1呈負相關(guān)（rs=-0.263，p＜0.05）。⑥Western Blot結(jié)果發(fā)現(xiàn)鱗狀細胞型顱咽管瘤的Fas蛋白表達量低于造釉細胞型顱咽管瘤的表達量。
　　 結(jié)論：⑴顱咽管瘤有復雜的炎癥反應，不同病理類型的顱咽管瘤IFN-α、TGF-β

16、1的表達程度不同。IFN-α可能是炎癥的趨化因子，促進炎癥的發(fā)展，而TGF-β1是炎癥抑制因子從而抑制炎癥。炎癥可能是顱咽管瘤鈣化、囊液形成、與周圍結(jié)構(gòu)緊密粘連等生物學特性形成的一個重要原因，也是造成的腫瘤與腫瘤周圍組織粘連導致腫瘤切除不完全而復發(fā)的重要原因之一。⑵炎癥因子IFN-α、TGF-β1可以調(diào)節(jié)Fas的表達，從而調(diào)控腫瘤細胞的增殖，IFN-α可以上調(diào)Fas表達促進腫瘤細胞凋亡，而TGF-β1相反可以抑制Fas表達促進腫瘤增殖。