HAND2蛋白在先天性巨結(jié)腸腸壁肌間神經(jīng)叢的表達(dá)研究.pdf

1、目的：先天性巨結(jié)腸(Hirschsprung’s disease,HSCR)又稱無神經(jīng)節(jié)細(xì)胞癥,是小兒外科常見消化道畸形之一,以胃腸道粘膜下(Submucosal plexuses)和肌間神經(jīng)叢(Myenteric plexuses)的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞缺失為其特征。對HSCR的病因及其發(fā)病機(jī)制的探索和研究一直是小兒外科領(lǐng)域的熱點(diǎn)課題,由于腸神經(jīng)系統(tǒng)(Enteric nervous system,ENS)中的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞起源于神經(jīng)脊細(xì)胞,它沿著迷

2、走神經(jīng)從頭端到尾端的方向進(jìn)入前腸,成為腸神經(jīng)脊細(xì)胞,從而分化為腸神經(jīng)元細(xì)胞。因此HSCR的發(fā)病機(jī)制的研究多集中在腸道神經(jīng)脊細(xì)胞的增殖、分化與移行異常等方面。了解HSCR的分子機(jī)制有助于我們了解其生物學(xué)上的易感性,并且可能在未來指導(dǎo)我們采取新的方法對HSCR進(jìn)行診斷與治療。我們前期利用全人類基因組表達(dá)譜芯片技術(shù)檢測出HSCR差異性表達(dá)基因,其中HAND2(Heart and neural crest derivatives express

3、ed 2)基因表達(dá)下調(diào),并經(jīng)RT-PCR驗(yàn)證。本研究從前期研究結(jié)果中選取HAND2蛋白,利用免疫組織化學(xué)方法觀察HAND2蛋白在HSCR腸壁肌間神經(jīng)叢的表達(dá)情況,初步探討HAND2蛋白在HSCR中的作用。
　　方法：選取2009年4月-2012年9月在廣東省婦幼保健院小兒外科經(jīng)手術(shù)治療的HSCR患兒手術(shù)標(biāo)本46例為實(shí)驗(yàn)組。均為散發(fā)病例,無合并其他主要臟器的先天性畸形或綜合癥。所有患兒依據(jù)術(shù)前臨床表現(xiàn)、鋇劑灌腸造影等檢查,以及術(shù)后病

4、理檢查綜合確診。選取與實(shí)驗(yàn)組年齡相近的非先天性巨結(jié)腸癥患兒,如先天性無肛門、結(jié)腸穿孔等20例手術(shù)切除的結(jié)腸標(biāo)本作為對照組,對照組家族中無先天性巨結(jié)腸病例及其它腸神經(jīng)發(fā)育異常性疾病。光鏡下觀察實(shí)驗(yàn)組與對照組病例HE染色的結(jié)果并統(tǒng)計(jì)。應(yīng)用免疫組化二步法染色檢測46例實(shí)驗(yàn)組標(biāo)本狹窄段、移行段、擴(kuò)張段、正常段及20例正常對照組標(biāo)本腸壁組織肌間神經(jīng)叢中HAND2蛋白的表達(dá),光鏡下觀察并統(tǒng)計(jì)其陽性表達(dá)情況,應(yīng)用計(jì)算機(jī)圖像分析軟件(Image-Pro

5、 Plus 6.0)計(jì)算HAND2蛋白在實(shí)驗(yàn)組及對照組各段腸管組織肌間神經(jīng)叢的免疫組化陽性染色的平均光密度值,將所得數(shù)據(jù)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行處理分析。
　　結(jié)果：1.HE染色:狹窄段各層均未見神經(jīng)節(jié)細(xì)胞,黏膜下及肌間神經(jīng)纖維較擴(kuò)張段顯著增粗紊亂。從狹窄段到正常腸管,神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的分布逐漸增多,變性神經(jīng)纖維的分布逐漸減少。
　　2.HAND2在先天性巨結(jié)腸實(shí)驗(yàn)組正常段腸管和對照組腸管組織的肌間神經(jīng)叢有陽性表達(dá),多呈強(qiáng)

6、陽性,其平均光密度值相比,差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)組正常段及對照組肌間神經(jīng)叢中,見有較多強(qiáng)陽性表達(dá)的神經(jīng)節(jié)和(或)神經(jīng)纖維;在擴(kuò)張段,強(qiáng)陽性表達(dá)肌間神經(jīng)節(jié)或神經(jīng)纖維較實(shí)驗(yàn)組正常段和對照組有減少;在移行段,多可見散在的中等強(qiáng)度陽性到弱陽性表達(dá)的神經(jīng)節(jié)或神經(jīng)叢;狹窄段,未見有陽性染色的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞,可見肌間神經(jīng)纖維表達(dá)呈弱陽性或陰性。狹窄段分別與移行段、擴(kuò)張段、正常段及對照組腸管相比,狹窄段的平均光密度明顯降低,差異有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.