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文檔簡介
1、目的:多囊卵巢綜合征(polycysticovarysyndrome,PCOS)是涉及神經(jīng)、內(nèi)分泌、代謝及卵巢局部等多種調(diào)控因素,表現(xiàn)為排卵障礙、高雄激素血癥及高胰島素血癥或胰島素抵抗為主的復(fù)雜性、異質(zhì)性臨床綜合癥。脂肪組織作為胰島素作用的經(jīng)典靶器官之一,尤其是內(nèi)臟脂肪組織在胰島素抵抗的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮了重要作用,脂肪組織作為重要的內(nèi)分泌器官,可以分泌許多生物活性物質(zhì),即脂肪因子。網(wǎng)膜素-1(omentin-1)是近幾年來發(fā)現(xiàn)的重要的
2、脂肪因子,廣泛參與糖脂代謝、炎癥、血管功能等,與代謝綜合征關(guān)系密切,而PCOS作為一種代謝綜合征疾病,網(wǎng)膜素-1在其中的表達(dá)國外研究顯示是下調(diào)的,而國內(nèi)鮮有報(bào)道。對(duì)于伴有胰島素抵抗的PCOS患者,提高胰島素敏感的藥物逐漸應(yīng)用臨床,二甲雙胍最為常用。因此本研究通過皮下注射雄激素的方法,建立PCOS大鼠模型,該模型與人類PCOS的代謝特點(diǎn)相似,并給予二甲雙胍治療,在此基礎(chǔ)上觀察網(wǎng)膜素-1在正常大鼠及PCOS大鼠中表達(dá)的變化及二甲雙胍的干預(yù)作
3、用,從而進(jìn)一步研究和探討多囊卵巢綜合征的發(fā)病機(jī)制及二甲雙胍對(duì)PCOS的治療作用。
方法:21日齡雌性SD大鼠45只,適應(yīng)性喂養(yǎng)2天后,從中隨機(jī)抽取11只作為正常對(duì)照組(NC組),17只作為PCOS模型組(MO組),17只作為二甲雙胍治療組(MF組)。MO組及MF組大鼠每日皮下注射1mg/100g體重的丙酸睪酮溶液,對(duì)照組同期皮下注射等體積的生理鹽水,連續(xù)5周。5周后檢測MO組及MF組大鼠血清睪酮升高及宮頸粘液涂片連續(xù)出現(xiàn)羊
4、齒狀結(jié)晶者符合PCOS模型。造模成功后MF組每天給予二甲雙胍200mg/kg,用無菌蒸餾水溶解灌胃,NC組及MO組每天給予等體積蒸餾水灌胃,連續(xù)3周。在MF組最后1次用藥24h后,各組大鼠行水合氯醛麻醉,快速心臟缺血法致死,測空腹血糖(FBG),收集血液分離血清,放射免疫法測睪酮(T)、雌二醇(E2)、孕酮(P)、黃體生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、胰島素(FINS),酶聯(lián)免疫法測定血清omentin-1、腫瘤壞死因子-α(TNF
5、-α)水平。留取雙側(cè)卵巢組織稱重,進(jìn)行病理學(xué)HE染色觀察卵巢形態(tài)學(xué)變化。采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
結(jié)果:
1、實(shí)驗(yàn)前三組大鼠體重?zé)o差異,8周末MO組大鼠體重較NC組無差異(P>0.05),MF組大鼠較NC組及MO組體重下降(P<0.05),MO組、MF組卵巢重量、卵巢重量/體重較NC組增加(P<0.05,P<0.05,P<0.05,P<0.05),但MF組卵巢重量、卵巢重量/體重較MO組下降(P
6、<0.05)。
2、實(shí)驗(yàn)5周末MO組及MF組大鼠中除5只大鼠恢復(fù)排卵外,余29只大鼠動(dòng)情周期失去規(guī)律性變化,均為羊齒狀結(jié)晶,提示無排卵,NC組大鼠保持規(guī)律的動(dòng)情周期,羊齒狀結(jié)晶及橢圓體均可見。8周末MO組大鼠涂片均為羊齒狀結(jié)晶,仍未恢復(fù)排卵,MF組大鼠部分恢復(fù)排卵,NC組大鼠仍保持規(guī)律的動(dòng)情周期。
3、MO組及MF組大鼠卵巢體積增大,色蒼白,表面可見擴(kuò)張的囊泡,白膜增厚。NC組大鼠卵巢色澤紅,表面光滑。HE染
7、色鏡檢,MO組大鼠卵巢可見早期發(fā)育較多的小卵泡及閉鎖卵泡,囊狀擴(kuò)張卵泡明顯,卵泡內(nèi)卵母細(xì)胞消失,顆粒細(xì)胞層數(shù)減少,卵泡膜細(xì)胞增生,黃體數(shù)量明顯下降,卵巢白膜增厚。MF組也有上述變化,但程度較MO組減輕。NC組鏡下卵巢結(jié)構(gòu)清晰,可見多個(gè)黃體及不同發(fā)育階段的卵泡,顆粒細(xì)胞呈多層,形態(tài)完整,排列整齊。
4、實(shí)驗(yàn)8周末MO組大鼠血清T較NC組升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),E2,P較NC組下降(P<0.05,P<0.05),但
8、LH,FSH,LH/FSH較NC組無差異(P>0.05,P>0.05,P>0.05)。MF組血清T較MO組無差異,但仍高于NC組(P>0.05),E2較MO組升高,但無明顯差異(P>0.05),而P較MO組升高,有明顯差異(P<0.05),LH,FSH,LH/FSH較MO組、NC組仍無差異(P>0.05,P>0.05,P>0.05)。
5、MO組大鼠8周后FBG,FINS,HOMA-IR較NC組均升高,有明顯差異(P<0.
9、05,P<0.05,P<0.05),MF組FBG,FINS,HOMA-IR較MO組明顯下降(P<0.05,P<0.05,P<0.05)。
6、MO組血清TNF-α較NC組升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),MF組較MO組下降,有差異(P<0.05),與NC組比較無差異(P>0.05)。
7、MO組血清omentin-1較NC組下降(42.83±30.34,P<0.05),MF組較MO組升高,有差異(70.01
10、±32.39,P<0.05),與NC組比較無差異(P>0.05)。
8、相關(guān)分析:血清omentin-1與P成正相關(guān)(P<0.05),與卵巢重量/體重,T,FINS,HOMA-IR,TNF-α成負(fù)相關(guān)(P<0.05,P<0.05,P<0.05,P<0.05,P<0.05),與E2,LH/FSH,FBG無相關(guān)性(P>0.05,P>0.05,P>0.05)。
結(jié)論:
1、應(yīng)用皮下注射雄激素法構(gòu)建的P
11、COS大鼠模型,其排卵功能障礙及相應(yīng)的代謝紊亂與人類相似,且該模型有一定的穩(wěn)定性,因此此模型可用于研究PCOS的發(fā)病機(jī)制及干預(yù)因素對(duì)PCOS的直接作用。
2、PCOS模型組大鼠血清網(wǎng)膜素-1水平明顯降低,腫瘤壞死因子-α水平明顯升高,提示網(wǎng)膜素-1及腫瘤壞死因子-α與PCOS密切相關(guān),可能在PCOS的發(fā)病機(jī)制中起重要作用,網(wǎng)膜素-1或許可作為診斷PCOS的指標(biāo)之一。
3、二甲雙胍還可能通過提高脂肪細(xì)胞因子網(wǎng)膜
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