1,25-二羥維生素D3對免疫性血小板減少癥模型小鼠的治療作用.pdf

1、目的：本實驗通過觀察并分析1,25-二羥維生素D3對于成功建立免疫性血小板減少癥(ITP)模型的小鼠的體重、血小板計數等各方面的治療作用；以及測量小鼠骨髓來源DC細胞表面CD80，CD86，MHC II表達水平，探討1,25-二羥維生素D3治療的作用機制。為臨床上應用1,25-二羥維生素D3治療ITP等自身免疫性疾病，提供了相關理論基礎。
　　方法：
　　1.豚鼠抗小鼠血小板抗血清的制備：取 BALB/c小鼠抗凝全血，分離出

2、血小板制成混懸液后分別與等量完全和不完全弗氏佐劑充分混合，分別于第0、1、2、4周注射于豚鼠背部、腹股溝及后足掌皮下免疫。第5周取豚鼠不抗凝全血，離心后獲得上清即為 GP-APS。腹腔給予BALB/c小鼠不同比例的GP-APS，觀察血小板下降幅度和持續(xù)時間，選取合適的稀釋倍數。
　　2.慢性模型的分組與建立：隨機將小鼠分為生理鹽水對照組，ITP模型組和1,25-二羥維生素D3治療組，模型組經腹腔給予GP-APS，治療組在模型組的基

3、礎上經尾靜脈注射給予100ng/d的1,25-二羥維生素D3，生理鹽水對照組均給予相同體積的生理鹽水經腹腔及尾靜脈注射給藥。在每次給藥后24h采血，測量血小板計數，并記錄體重，評價出血傾向等。于2周后處死小鼠并解剖，取骨髓涂片，鏡下計數巨核細胞數。
　　3.細胞培養(yǎng)：隨機從治療組和模型組各取一只 BALB/c小鼠，在無菌環(huán)境下取股骨髓腔內骨髓，收集后過濾，去除紅細胞并洗滌兩次。加入無菌完全培養(yǎng)基(其中含GM-CSF20ng/ml，

4、IL-410ng/ml，雙抗及胎牛血清)將收集的細胞重懸，并按照之前的分組移至6孔培養(yǎng)板中，做上標記。
　　4.觀察細胞形態(tài)學變化：每天將六孔板放置于倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)等變化。5.流式檢測 CD86，CD80和MHC II類分子表達：收集第7天細胞，加入PE-cy5-CD86、FITC-CD80、PE-MHCⅡ，避光條件下室溫孵育30min。洗滌兩次后重懸細胞，上機分析。
　　結果：1,25-二羥維生素D3處理后，注射

5、第10天開始，治療組小鼠體重較模型組明顯上升(p<0.05)，血小板數較模型組明顯上升(p<0.01)，出血傾向明顯降低(x2<0.05)，差異有統(tǒng)計學意義。1,25-(OH)2D3治療組的DC細胞表面CD86和MHC II表達水平較模型組明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)；CD80的表達有所降低，但差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。
　　結論：
　　1.1,25-(OH)2D3對ITP模型小鼠在體重飲食等一般情況、