氯氮平分散片體內(nèi)藥物分析方法及健康人體藥代動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、目的：建立采用高效液相色譜-質(zhì)譜連用儀測(cè)定人血漿中氯氮平濃度的方法，進(jìn)行受試制劑氯氮平分散片與市售參比制劑氯氮平片的單劑口服雙交叉兩周期人體生物等效性試驗(yàn)，評(píng)價(jià)其生物等效性，為新藥報(bào)批及其臨床應(yīng)用提供試驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：采用HPLC-MS法測(cè)定氯氮平血漿藥物濃度。色譜條件：Diamonsil C18色譜柱(150mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相為甲醇-0.005mol·L-1乙酸銨溶液(80∶20)；流速0.8mL·min

2、-1；柱溫25℃；進(jìn)樣量5μL。質(zhì)譜條件：AP-ESI離子源，正離子模式，干燥氣(N2)流速11.0L·min-1，干燥氣壓力50psig，干燥氣溫度為350℃，毛細(xì)管電壓4000V，選擇性監(jiān)測(cè)質(zhì)荷比(M/Z)為327.2(氯氮平)和266.1(內(nèi)標(biāo)米氮平)的離子峰，碎片電壓分別為130V和120V。
　　 試驗(yàn)采用兩周期交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)。健康志愿者20名，男性，按體重配對(duì)后隨機(jī)分為兩組，分服受試制劑氯氮平分散片或參比制劑氯氮平片，

3、于藥前和藥后0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、5、8、12、24、36、48h取肘靜脈血4mL，立即移入肝素抗凝管中，靜置，5000rpm離心5min，取血漿分雙份于-20℃貯存?zhèn)錅y(cè)。一周后重復(fù)上述試驗(yàn)。
　　 采用高效液相色譜-質(zhì)譜(HPLC-MS)法測(cè)定氯氮平經(jīng)時(shí)血藥濃度。氯氮平血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)經(jīng)DAS2.0實(shí)用藥代動(dòng)力學(xué)計(jì)算程序處理，得受試制劑和參比制劑氯氮平藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，并根據(jù)受試制劑和參比制劑氯氮平A

4、UC0-48計(jì)算受試制劑的相對(duì)生物利用度。同時(shí)對(duì)主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)進(jìn)行方差分析、雙單側(cè)t檢驗(yàn)和(1-2α)置信區(qū)間分析，評(píng)價(jià)受試制劑和參比制劑的生物等效性。
　　 結(jié)果：該測(cè)定方法定量下限為2ng·mL-1；氯氮平在2～400ng·mL-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9988)，絕對(duì)回收率試驗(yàn)結(jié)果表明氯氮平血漿樣品濃度為5、50、350ng·mL-1和米氮平濃度為50ng·mL-1，平均回收率分別為70.12％、64.32％

5、、70.50％和64.12％；相對(duì)回收率試驗(yàn)結(jié)果表明氯氮平血漿樣品濃度為5、50、350ng·mL-1的回收率分別為100.71％、97.10％、98.82％；日內(nèi)、日間變異均小于10％；樣品在-20℃放置14天、經(jīng)歷二次冷凍-解凍循環(huán)穩(wěn)定；質(zhì)控樣本相對(duì)偏差均在±10％范圍內(nèi)。
　　 受試制劑氯氮平分散片和參比制劑氯氮平片主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)t1/2分別為(14.019±4.012)h和(14.562±3.746)h，Tmax分別

6、為(2.425±0.832)h和(2.300±0.470)h， Cmax分別為(138.183±52.958) ng·mL-1和(138.880±46.467)ng·mL-1，AUC0-48分別為(1822.893±580.029)ng·mL-1·h和(1848.438±574.998)ng·mL-1·h，AUC0～∞分別為(2031.682±705.293)ng·mL-1·h和(2063.239±668.203)ng·mL-1·h。受

7、試制劑氯氮平分散片相對(duì)生物利用度F為99.1％±11.0％。
　　 結(jié)論：本研究建立的HPLC-MS法測(cè)定人血漿中氯氮平濃度的方法經(jīng)驗(yàn)證，方法靈敏、準(zhǔn)確、選擇性高、特異性好、操作簡(jiǎn)便易行，與HPLC法相比具有明顯的優(yōu)勢(shì)，可作為人血漿中氯氮平濃度的測(cè)定方法。
　　 多因素方差分析顯示，受試制劑氯氮平分散片和參比制劑氯氮平片單劑口服雙交叉試驗(yàn)主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)藥物間和周期間無(wú)顯著性差異。進(jìn)一步雙單側(cè)t檢驗(yàn)和(1-2α)置信區(qū)