轉(zhuǎn)化生長因子β1及缺氧對人胰腺癌PANC-1細(xì)胞株EMT和干細(xì)胞表型的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的:探討轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforminggrowthfactorβ1,TGF-β1)及缺氧體外對胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)和干細(xì)胞特征的影響。
　　方法:分別以TGF-β110ng/ml和1％O2物理缺氧處理人胰腺癌PANC-1細(xì)胞株不同時(shí)間后,應(yīng)用蛋白質(zhì)印跡法(WesternBlot)檢測缺氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia-indu

2、ciblefactor-1α,HIF-1α)、E-cadherin、vimentin、CD133、OCT-4的蛋白表達(dá)水平;實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-timefluorogenticquantitative-PCR)檢測E-cadherin、vimentin、CD133、OCT-4mRNA的水平;利用流式細(xì)胞儀檢測TGF-β110ng/ml和1%物理缺氧處理前后細(xì)胞PANC-1細(xì)胞株中CD133+細(xì)胞的百分比。
　　結(jié)果:TG

3、F-β1及缺氧均可改變胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1細(xì)胞的形態(tài),使其由上皮細(xì)胞形態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)殚g質(zhì)細(xì)胞形態(tài)。
　　PANC-1細(xì)胞經(jīng)TGF-β1處理12h、24h、36h、48h后,蛋白質(zhì)印跡法檢測結(jié)果顯示隨著處理的時(shí)間延長vimentin和CD133表達(dá)明顯增加、E-cadherin和OCT-4表達(dá)明顯下調(diào)(p<0.05)。Real-timePCR顯示隨著處理的時(shí)間延長vimentin和CD133mRNA水平明顯增加、E-cadherin和

4、OCT-4mRNA水平明顯下調(diào)(p<0.05)。流式細(xì)胞學(xué)結(jié)果顯示,經(jīng)TGF-β1處理12h、24h、36h、48h后,CD133+細(xì)胞百分比分別為10.64%、34.87%、21.12%、28.33%,與對照組相比具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)。
　　PANC-1細(xì)胞經(jīng)1%O2缺氧處理2h、4h、6h、12h后,蛋白質(zhì)印跡法檢測結(jié)果顯示缺氧處理4h、6h、12h后HIF-1α表達(dá)逐漸增加,具有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05

5、);隨著缺氧時(shí)間延長,vimentin和CD133表達(dá)逐漸增加,E-cadherin和OCT-4表達(dá)逐漸下調(diào)(p<0.05);Real-timePCR顯示vimentin和CD133mRNA水平逐漸增加,E-cadherin和OCT-4mRNA水平逐漸下調(diào)(p<0.05)。流式細(xì)胞學(xué)結(jié)果顯示缺氧處理2h、4h、6h、12h后,CD133+細(xì)胞百分比分別為4.16%、3.46%、3.46%和1.69%,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。<