2型糖尿病小鼠胰腺中MMP-2、MMP-9、TIMP-1、NFκBp65的表達.pdf

1、目的：隨著人們生活水平的提高，糖尿病（diabetes mellitus DM）的發(fā)病率正在逐年提高，人群中發(fā)病以2型糖尿?。╰ype2 diabetes mellitus，T2DM）為主，其病因和發(fā)病機理目前尚不十分清楚?；|(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）及其抑制因子（tissue inhibitor of metalloproteinases TIMPs），參與體內(nèi)多種生理和病理過程，MM

2、Ps和TIMPs的代謝紊亂，可以引起糖尿病、肝硬化、腫瘤等多種疾病，MMPs不僅參與ECM代謝的調(diào)控，在疾病狀態(tài)下ECM的重塑中也起著重要作用，且與活動性炎癥有一定關(guān)系；細胞核因子（NFкB）與細胞的增殖、凋亡及其炎癥反應(yīng)關(guān)系密切，是否參與糖尿病胰島細胞的病理改變，有待進一步證實。本研究應(yīng)用光鏡觀察db/db自發(fā)性2型糖尿病小鼠病情發(fā)展過程中胰島的形態(tài)學(xué)變化。用免疫組化方法觀測基質(zhì)金屬蛋白酶中的明膠酶（MMP-2、MMP-9）及其抑制因

3、子（TIMP-1）、核因子（NFкBp65）在db/db自發(fā)性
　　 2型糖尿病小鼠胰腺中的表達情況，闡明它們與糖尿病發(fā)病的關(guān)系。為進一步探討2型糖尿病的發(fā)病機理提供理論依據(jù)，并為探索糖尿病新的治療方法開辟新的途徑。
　　 材料和方法：引進日本C57b1/Ksj-db/十m表型正常隱性基因小鼠，飼養(yǎng)于無菌包中，自由攝水、飲食，近親（兄妹）交配。其純合子1/4后代，即db/db小鼠表現(xiàn)為肥胖和高血糖，是研究2型糖尿病（T2

4、DM）的良好動物模型。分別選取3，5，8，10，12月齡db/db糖尿病小鼠及相應(yīng)年齡段的－db/+m正常小鼠，每組6只，4％多聚甲醛灌流固定，取胰尾后固定，常規(guī)石蠟包埋、切片，然后分別進行光鏡及免疫組織化學(xué)研究。
　　 結(jié)果：
　　 1、不同病程和年齡階段小鼠血糖值和體重
　　 db/db糖尿病小鼠于生后3～4周齡時，其血糖開始升高，并且隨著糖尿病病情的進展，血糖逐漸升高，對照組隨著月齡的增高血糖無明顯變化。糖

5、尿病組小鼠體重較正常組明顯增加（10月和12月齡時糖尿病小鼠體重雖然急劇下降，但仍高于正常對照組）。
　　 2、db/db糖尿病小鼠隨著糖尿病病情的進展，胰島結(jié)構(gòu)發(fā)生了一系列變化，表現(xiàn)為隨著月齡的增加，胰島體積增大，數(shù)量增多。與對照組比較，有顯著性差異（P<0.05）。胰島細胞排列紊亂、間隙增寬、結(jié)締組織增多、細胞間可見大量空泡、血管數(shù)量增多、擴張，隨著月份的增加上述表現(xiàn)加重，胰島形態(tài)變得更不規(guī)則，部分胰島萎縮、崩解。
　

6、　 3、免疫組織化學(xué)結(jié)果
　　 3.1 MMP-2陽性反應(yīng)產(chǎn)物在糖尿病組和對照組均位于胰島細胞胞漿內(nèi)，呈棕黃色。陽性細胞平均光密度值（OD值）比較，糖尿病組隨著月齡的增加表達明顯增強，至12月齡小鼠胰腺中表達最強。糖尿病組間比較，有顯著性差異（P<0.05），糖尿病組間兩兩比較結(jié)果：除外10月和12月間，其它各組間比較均有顯著性差異（P<0.05）。正常組各月齡OD值隨著月齡的增加表達增強，正常組間比較，無顯著性差異（P>0.

7、05）。同月齡糖尿病組與正常組比較表達明顯增強，有顯著性差異（P<0.05）。
　　 3.2 MMP-19陽性反應(yīng)產(chǎn)物在糖尿病組和對照組均位于胰島細胞胞漿內(nèi)，胰島周邊細胞表達較強，呈棕黃色，糖尿病組OD值隨著月齡的增加表達增強，12月齡小鼠胰腺表達最強。糖尿組間比較，有顯著性差異（P<0.05），糖尿病組間兩兩比較結(jié)果：除外8月和10月間，其它各組間比較有顯著性差異（P<0.05）。正常組各月齡OD值，隨著月齡的增加表達增強，正

8、常組間比較，無顯著性差異（P>0.05）。同月齡糖尿病組與正常組比較表達明顯增強，有顯著性差異（P<0.05）。
　　 3.3 TIMP-1陽性反應(yīng)產(chǎn)物位于胰島細胞胞漿內(nèi)，呈棕黃色，糖尿病組OD值，3月齡小鼠胰腺表達最強，隨著月齡的增加表達減弱，12月齡表達最弱，糖尿組間比較，無顯著性差異（P>0.05）。正常組各月齡OD值3月份胰腺表達最強，隨著月齡的增加表達減弱，12月齡表達最弱，正常組間比較，無顯著性差異（P>0.05）。

9、同月齡糖尿病組與正常組比較表達明顯減弱，有顯著性差異（P<0.05）。
　　 3.4 NFκBp65陽性反應(yīng)產(chǎn)物在糖尿病組和對照組均位于胰島細胞胞漿內(nèi)，呈棕黃色，胰島周邊細胞的陽性表達略高。糖尿病組OD值隨著月齡的增加表達增強，12月齡小鼠胰腺表達最強，糖尿組間比較，有顯著性差異（P<0.05），糖尿病組間兩兩比較結(jié)果：除外5月和8月間，其它各組間比較均有顯著性差異（P<0.05）。正常組各月齡OD值，3月齡小鼠胰腺表達最弱，隨

10、著月齡的增加表達增強，正常組間比較，無顯著性差異（P>0.05）。同月齡糖尿病組與正常組比較表達明顯增強，有顯著性差異（P<0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1、2型糖尿病db/db小鼠胰島隨著病情的加重，胰島體積增大，胰島細胞排列紊亂，部分胰島破裂萎縮、崩解，其結(jié)構(gòu)和功能的損傷呈進行性加重，說明胰島細胞功能的損傷對糖尿病的發(fā)生、發(fā)展起著至關(guān)重要的作用。
　　 2、基質(zhì)金屬蛋白酶中的MMP-2、MMP-9在2型糖