源于健康人與肝癌患者CIK細(xì)胞的生物學(xué)特性及抗癌活性的對比研究.pdf

1、免疫細(xì)胞生物學(xué)和免疫分子生物學(xué)的進展，推進了免疫學(xué)在腫瘤治療中的應(yīng)用。現(xiàn)今，腫瘤免疫治療已成為腫瘤治療的基本手段之一。其中細(xì)胞介導(dǎo)的過繼免疫治療(Adoptivecellularimmunotherapy，ACI)為當(dāng)前研究的熱點之一。過繼性細(xì)胞免疫治療是指通過給腫瘤患者輸入特異性的或非特異性的具有抑制腫瘤細(xì)胞生長的免疫效應(yīng)細(xì)胞，直接殺傷腫瘤細(xì)胞或在患者體內(nèi)誘發(fā)機體免疫反應(yīng)達到抑制和治療腫瘤的目的。細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(Cytokin

2、e-inducedkiller，CIK)是一種新型的免疫殺傷細(xì)胞，是ACI研究的熱點之一。 目前有關(guān)腫瘤免疫效應(yīng)細(xì)胞的研究和臨床的初步資料提示細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞是一種新型高效的具有廣譜殺瘤活力的MHC非限制性的免疫效應(yīng)細(xì)胞，具有增殖速度快、殺傷活性高、臨床應(yīng)用副作用小等優(yōu)點，是目前發(fā)現(xiàn)的殺瘤活性最強的免疫效應(yīng)細(xì)胞之一，成為腫瘤免疫治療的熱點。 本實驗收集6名健康獻血者和6名肝癌患者鮮血者的新鮮外周血，分別通過常規(guī)分離

3、外周血單個核細(xì)胞，應(yīng)用相應(yīng)細(xì)胞因子體外誘導(dǎo)分化出CIK細(xì)胞，并動態(tài)觀察CIK細(xì)胞的生物學(xué)特性、體外增殖活性、細(xì)胞表型和細(xì)胞毒活性變化。然后將兩種來源的CIK細(xì)胞的生物學(xué)特性及體內(nèi)外殺瘤活性進行對比研究。對CIK細(xì)胞抗瘤機制做進一步研究，對過繼免疫療法治療肝癌進行新的探索，為CIK細(xì)胞進一步應(yīng)用于臨床提供理論依據(jù)。 第一部分CIK細(xì)胞體外增殖和殺瘤活性研究 目的：觀察源于健康人與肝癌患者CIK細(xì)胞細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞表型、增殖

4、活性及細(xì)胞毒活性的變化及對比研究。 方法：提取6健康供血者和6名肝癌患者的PBMC，通過序列添加IFN-γ、CD3McAb、IL-2、IL-1，進行CIK培養(yǎng)，動態(tài)觀察兩種來源CIK細(xì)胞的增殖活性；在流式細(xì)胞儀上做動態(tài)培養(yǎng)物的表型分析；并用MTT法檢測兩種來源CIK細(xì)胞殺傷SMMC-7721肝癌細(xì)胞的活性。 結(jié)果： 1．兩種來源CIK細(xì)胞的增殖性能無明顯區(qū)別，p＜0.05℃IK細(xì)胞具有培養(yǎng)方法簡易、擴增迅速，兩種

5、來源CIK細(xì)胞前后擴增分別達到152.667×107、143.500×107。 2．以SMMC-7721肝癌為靶細(xì)胞，在1.25：1-10：1的效靶比范圍內(nèi)，兩種來源的CIK細(xì)胞的殺傷活性均無明顯差異。但對SMMC-7721肝癌細(xì)胞殺傷明顯。兩種來源CIK細(xì)胞在效靶比為10：1時對肝癌細(xì)胞的殺傷率最高，分別為0.262、0.260。 3．兩種來源CIK細(xì)胞表面分子CD3+CD56+、CD45RA+的變化無明顯差異，源于肝

6、癌患者CIK細(xì)胞的CD8+的陽性率與源于健康人CIK細(xì)胞的CD8+的陽性率有明顯差異，前者高于后者；但隨著培養(yǎng)時間的延長，兩種來源CIK細(xì)胞中CD3+CD56+雙陽性細(xì)胞和CD8+細(xì)胞的百分含量逐漸升高，而CD45RA+細(xì)胞的百分含量逐漸減少。 結(jié)論： 源于健康人CIK細(xì)胞與源于肝癌患者CIK細(xì)胞的生物學(xué)特性、增值活性及細(xì)胞毒活性均無明顯差異；源于肝癌患者CIK細(xì)胞的CD8+陽性率高于健康人來源的CIK細(xì)胞CD8+陽性率

7、，CD3+CD56+、CD45RA+的陽性率無明顯差異。CIK細(xì)胞培養(yǎng)簡易、擴增迅速。對肝癌細(xì)胞SMMC-7721殺傷率高。具有良好的臨床應(yīng)用前景。 第二部分CIK細(xì)胞聯(lián)合化療的抗腫瘤研究 目的：觀察CIK細(xì)胞表型、體外增殖活性和細(xì)胞毒活性變化，并探討CIK細(xì)胞對化療的輔助治療作用。 方法：提取健康供血者的PBMC，常規(guī)誘導(dǎo)出CIK細(xì)胞，動態(tài)觀察培養(yǎng)物增殖活性和表型變化；并用MTT法測定其體外細(xì)胞毒活性；在Bal