PD-1與急性乙型肝炎進(jìn)展相關(guān)性研究.pdf

1、目的:觀察急性乙型肝炎(Acute hepatitis B，AHB)發(fā)病過(guò)程中患者體內(nèi)HBV特異性CD8+T細(xì)胞上免疫抑制性分子程序性死亡因子1(Programmed cell death1，PD-1)的表達(dá)及其動(dòng)態(tài)變化、功能特點(diǎn)，揭示其與記憶性T細(xì)胞形成的關(guān)系，探討PD-1與急性乙型肝炎進(jìn)展的相關(guān)性。
　　 方法:合成4種識(shí)別HBV不同抗原表位的五聚體，同時(shí)采集16例HLA-A2陽(yáng)性的急性乙肝患者病程早期的外周血，用五聚體染色

2、后，通過(guò)流式細(xì)胞儀分析HBV特異性CD8+T細(xì)胞的頻率及其表面PD-1分子的表達(dá)特點(diǎn)。同時(shí)進(jìn)行肝功能、乙肝5項(xiàng)和血清HBV DNA檢測(cè)。并用肽刺激及細(xì)胞內(nèi)染色方法檢測(cè)HBV特異性CD8+T細(xì)胞的增殖和產(chǎn)生細(xì)胞因子的能力。而且，長(zhǎng)期隨訪18例HLA-A2陽(yáng)性的急性乙型肝炎患者，分早、中、晚期用流式細(xì)胞儀檢測(cè)HBV特異性CD8+T細(xì)胞上抑制性分子PD-1、記憶性細(xì)胞標(biāo)志CCR7、CD45RA、CD127和活化標(biāo)志CD38的表達(dá)，檢測(cè)凋亡情況

3、，檢測(cè)阻斷PD-1/PD-L1信號(hào)通路前后，不同階段HBV特異性CD8+T細(xì)胞增殖及產(chǎn)生細(xì)胞因子的變化情況，并結(jié)合臨床資料，綜合分析PD-1/PD-L1在急性HBV感染過(guò)程中與記憶性T細(xì)胞形成的關(guān)系。
　　 結(jié)果:所有AHB病人發(fā)病早期均表現(xiàn)出高頻度、多特異性的HBV特異性CD8+T細(xì)胞反應(yīng)，并且PD-1表達(dá)在這些細(xì)胞上被明顯上調(diào)。體外阻斷PD-1/PD-L1間的相互作用能夠恢復(fù)HBV特異性CD8+T細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的能力。相關(guān)

4、性分析也顯示PD-1分子的上調(diào)表達(dá)與轉(zhuǎn)氨酶水平呈正相關(guān)。隨訪發(fā)現(xiàn)，AHB病人發(fā)病早期表現(xiàn)出的高頻度、多特異性的HBV特異性CD8+T細(xì)胞反應(yīng)和在HBV特異性CD8+T細(xì)胞上的PD-1高表達(dá)在晚期均明顯降低。而且，早期高表達(dá)PD-1的HBV表位特異性CD8+T細(xì)胞凋亡程度明顯高于中、低水平表達(dá)PD-1的HBV表位特異性CD8+T細(xì)胞。在高表達(dá)PD-1的病程早期，HBV特異性CD8+T細(xì)胞的增殖及產(chǎn)生細(xì)胞因子的能力均較弱，中、晚期隨著PD-

5、1的下降或消失，上述能力均明顯增強(qiáng)。早、中期阻斷PD-1/PD-L1信號(hào)通路可以明顯提高上述功能。隨著病程中、晚期肝功正常，HBsAg陰轉(zhuǎn)，HBVDNA低于檢測(cè)值，HBV特異性cD8+T細(xì)胞上記憶性細(xì)胞標(biāo)志CCR7、CD45RA和CD127表達(dá)逐漸升高，而活化標(biāo)志CD38表達(dá)逐漸下降，提示記憶性T細(xì)胞的形成。
　　 結(jié)論:在HBV急性感染過(guò)程早期PD-1/PD-L1通路在調(diào)節(jié)HBV特異性CD8+T細(xì)胞功能方面起重要作用。PD-1