乙型肝炎病毒X基因突變與疾病進展的相關性研究.pdf

1、研究背景及目的：全球約20億人感染過乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)，其中有3.5億人為HBV慢性感染者，每年約有100萬慢性感染者死亡。HBV嚴重威脅著人類的健康。
　　 HBV基因組為長約3.2kb的部分環(huán)狀雙鏈DNA，負鏈核苷酸序列至少有4個開放讀碼框架(open reading frame，ORF):S，P，C和X。其中，HBV X基因是HBV基因組內結構和功能重疊最明顯的區(qū)域，包含增強子2(E

2、nh2)、C基因啟動子、直接重復序列DRI和DR2，這些區(qū)段在HBV基因的復制、轉錄調節(jié)及表達中具有重要作用。HBV X基因編碼蛋白HBx包含6個區(qū)(A～F)，共154個氨基酸(amino acid，aa)。HBx是HBV基因組所編碼蛋白中唯一具有多種調控功能的蛋白質，這種調控功能包括：激活宿主細胞和病毒自身基因的轉錄、調控凋亡、抑制細胞中受損DNA的外切修復反應、增強原癌基因的轉錄活性、激活人端粒酶反轉錄酶、激活細胞中信號轉導通路和促

3、進肝纖維化等。HBx通過多種調控作用直接或間接地對病毒自身的復制、宿主細胞中基因的表達、細胞的凋亡與癌變等過程產生廣泛的影響。HBV X基因及HBx成為近年來國內外的研究熱點。
　　 慢性HBV感染有不同的臨床階段，包括無癥狀攜帶者(asymptomatic carrier,ASC)、慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B，CHB)、肝硬化（liver cirrhosis，LC）和肝細胞癌(hepatocellul

4、ar carcinoma,HCC)。造成HBV慢性感染者疾病不同轉歸的機制尚不明確。HBV復制是以mRNA為中間體的逆轉錄復制，由于HBV逆轉錄酶缺乏校正功能并且病毒復制活躍，結果導致HBV突變經常發(fā)生。近幾年，HBV X基因與肝癌的關系研究較多，但是，HBV X基因突變與HBV慢性感染的發(fā)展和轉歸之間的關系，尚未見詳細研究報道。本文通過對122例不同臨床階段的HBV慢性感染者HBV X基因序列進行測定和比較，探討了HBV X基因突變與

5、疾病進展的關系，并分析了HBV X基因熱點突變與HBV血清標志物和HBVDNA定量之間的相關關系，為豐富HBV致病理論、判斷病情進展和肝癌的預防提供了新思路。
　　 方法：隨機選擇122例山東籍HBV慢性感染者，其中，無癥狀攜帶者35例、慢性乙型肝炎35例、肝硬化22例和肝細胞癌30例。所有患者均空腹抽血，并制備血清。應用巢式聚合酶鏈反應(nested PCR)對122例HBV慢性感染者）X基因進行擴增。PCR產物純化后應用美國

6、ABI-PRISM3730型DNA自動熒光測序儀進行雙向序列測定。測序結果應用BioEdit7.0、Clustal W軟件與標準序列進行比較。HBV標志物和HBV DNA定量分別應用酶聯免疫吸附法(ELISA)和熒光定量聚合酶鏈反應(FQ-PCR)進行檢測，分析HBV X基因熱點突變與HBV標志物和HBV DNA定量的關系。
　　 結果；①ASC、CHB、LC和HCC4組患者HBV X基因堿基累積突變率分別為1.06％、1.20

7、％、1.92％和2.34％，其中，HCC和LC患者均明顯高于ASC和CHB患者(p<0.05)。②HCC和LC患者HBV X基因區(qū)A1762T/G1764A雙突變、T1753C點突變和C1653T點突變發(fā)生率均明顯高于ASC和CHB患者(p<0.05)。③HCC和LC患者TI719G點突變發(fā)生率均明顯低于ASC和CHB患者(p<0.05)④C1485T點突變和A1499G點突變的發(fā)生率4組患者間均沒有統(tǒng)計學差異(p>0.05)。⑤36例

8、HBeAg陰性患者中A1762T/G1764A雙突變、T1753C點突變和C1653T點突變的發(fā)生率(分別為83.33％、44.44％和30.56％)均明顯高于86例HBeAg陽性患者(分別為25.58％、4.65％和3.49％，p均小于0.05)；36例HBeAg陰性患者與86例HBeAg陽性患者TI719G點突變發(fā)生率（分別為41.67％和45.35％）之間沒有統(tǒng)計學差異(p=0.71)。⑥52例A1762T/G1764A雙突變患者

9、HBV DNA定量（6.02±1.17log copies/mL）明顯低于70例無突變患者（7.43+-0.96log copies/mL，p=O.00）；20例T1753C點突變患者的HBV DNA定量（4.62+-1.96log copies/mL）明顯低于102例無突變患者(6.99+-1.60logcopies/mL，p=0.00)：C1653T點突變和T1719G點突變患者（分別為14例和54例）HBV DNA定量與無突變患者

10、（分別為108例和68例）之間均沒有統(tǒng)計學差異(p=0.69和0.09)。
　　 結論：
　　 1.HCC和LC的發(fā)生與HBV X基因突變的累積密切相關；
　　 2.A1762T/G1764A雙突變、T1753C點突變和C1653T點突變在HCC和LC形成中可能發(fā)揮了重要作用；
　　 3.T1719G突變可能降低HBV的致病作用和致癌作用；
　　 4.A1762T/G1764A雙突變、T1753C