超促排卵周期卵泡發(fā)育特點及卵母細(xì)胞發(fā)育潛能的相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、本研究根據(jù)當(dāng)前卵泡發(fā)育和卵子成熟研究范疇內(nèi)的趨勢和國內(nèi)的研究基礎(chǔ)，以超排促排卵對卵泡發(fā)育的干預(yù)和影響、超排卵周期卵母細(xì)胞發(fā)育潛能預(yù)測以及卵巢低反應(yīng)發(fā)生機(jī)制為切入點，探討超促排卵周期卵泡發(fā)育、卵母細(xì)胞成熟的特點及其相關(guān)機(jī)制，為進(jìn)一步明確卵泡發(fā)育調(diào)控機(jī)理和提高ART的安全性和成功率提供依據(jù)。 第一部分:超促排卵周期卵泡液蛋白質(zhì)組學(xué)研究 研究目的:本研究的目的是通過研究超促排卵周期與自然周期卵泡卵泡液蛋白質(zhì)組表達(dá)譜的改變，以助

2、于闡明在超排周期中卵泡發(fā)育的特點，以及進(jìn)一步探索超促排卵對卵泡發(fā)育的影響。 材料和方法:采集自然周期與超促排卵周期卵泡液各6例，用二維凝膠電泳分離蛋白質(zhì)組成分，銀染染色后用PD-Quest軟件分析數(shù)字化的凝膠圖像，找出超促排卵周期差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點，采用膠內(nèi)酶解消化方法得到差異蛋白斑點多肽混合物，用基質(zhì)輔助激光解吸．串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行蛋白質(zhì)鑒定。 結(jié)果:1.通過分析二維凝膠電泳圖譜，13個蛋白斑點在超促排卵周期卵泡液中表達(dá)量較

3、自然周期組增加或減少2倍以上，并經(jīng)Student's t-test檢驗，表達(dá)量兩組有顯著差異(P<0.05)。其中11個點在超排周期中表達(dá)水平上調(diào)，另2個點在超排周期中表達(dá)水平下調(diào)。2.通過膠內(nèi)酶解消化、基質(zhì)輔助．激光解離／離子-飛行時間質(zhì)譜或串聯(lián)質(zhì)譜分析得到差異表達(dá)的蛋白斑點的肽質(zhì)指紋圖譜，通過MASCOT搜索引擎在NCBI蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫中檢索，其中8個蛋白斑點成功得到鑒定。這些鑒定蛋白質(zhì)包括觸珠蛋白、富含亮氨酸a2糖蛋白、鋅-α2-糖

4、蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白，α1-抗胰蛋白酶，補(bǔ)體C3等。這些蛋白參與排卵、細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)、類脂／類固醇代謝等過程。3.分別用速率散射比濁法和westem印跡驗證其中4個蛋白質(zhì)的表達(dá)趨勢：觸珠蛋白、補(bǔ)體C3、轉(zhuǎn)鐵蛋白和僅卜抗胰蛋白酶，其表達(dá)趨勢與二維電泳結(jié)果一致。 結(jié)論:通過蛋白質(zhì)組學(xué)研究技術(shù)發(fā)現(xiàn)在超促排卵卵泡發(fā)育與卵母細(xì)胞成熟存在差異，其中與排卵、免疫反應(yīng)、類脂／類固醇代謝相關(guān)的蛋白質(zhì)表達(dá)發(fā)生異常變化，為進(jìn)一步探索超促排卵對卵母細(xì)胞發(fā)育和成

5、熟的影響提供了重要的線索。 第二部分:人卵泡液骨形成蛋白-15水平與超排卵周期卵母細(xì)胞發(fā)育研究 目的：研究卵母細(xì)胞來源因子骨形成蛋白-15(Bone morphogenetic orotein-15，BMP-15)在人卵泡液中的水平及其與卵母細(xì)胞質(zhì)量、發(fā)育能力和后續(xù)胚胎質(zhì)量的關(guān)系。 材料和方法：對79例因男性因素不孕的進(jìn)行卵胞漿內(nèi)精子注射(ICSI)的患者，采用常規(guī)促超排卵方案，采集每位患者1.8～2.0cm卵泡

6、卵泡液一份，共采集79例行ICSI治療的患者的79個卵泡中的卵母細(xì)胞和卵泡液，卵母細(xì)胞單獨培養(yǎng)，評價其受精和胚胎發(fā)育情況。western blot法檢測卵泡液中的BMP-15水平；放免法檢測卵泡液雌二醇(Estradiol，E2)、孕酮(Progesterone，P4)和促性腺激素(Follicle stimulating hormone，F(xiàn)SH)水平。 結(jié)果:卵母細(xì)胞按其后續(xù)受精、卵裂和胚胎發(fā)育情況分別進(jìn)行分組，受精組和卵裂組

7、卵母細(xì)胞卵泡液BMP-15水平顯著高于未受精和未卵裂的卵母細(xì)胞的卵泡液(P<0.05)。優(yōu)質(zhì)胚胎組卵母細(xì)胞卵泡液BMP-15水平顯著高于二級和三級胚胎(P<0.01)。卵泡液BMP-15和E2水平呈顯著性正相關(guān)(P<0.01)，與卵泡液FSH水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.01)。 結(jié)論:卵泡液BMP-15水平可能是一個預(yù)測卵母細(xì)胞質(zhì)量和后續(xù)胚胎發(fā)育能力的一個有價值的指標(biāo)。 第三部分:人卵泡液中BMP-15水平與卵巢低反應(yīng)研究

8、 目的：研究超排卵周期卵巢低反應(yīng)患者卵泡液中BMP-15、SCF的水平及其與妊娠結(jié)局之間的關(guān)系。 材料與方法：對90例因管性因素不孕而行進(jìn)行體外受精．胚胎移植(In VitroFertilization-Embryo Transfer，IVF-ET)的患者，采用本常規(guī)促超排卵方案，用Westem印跡方法測定取卵時各組卵泡液中BMP-15的水平，用ELISA法檢測卵泡液SCF水平。按取卵時卵泡發(fā)育數(shù)目不同，將卵巢對超排卵藥物的

9、反應(yīng)分為低反應(yīng)型(卵泡數(shù)43)、正常反應(yīng)型(卵泡數(shù)4.13個)。將低反應(yīng)組和正常反應(yīng)組患者分別按卵泡液平均BMP．15或SCF水平將其分為高水平組和低水平組，比較其IVF-ET的結(jié)局。 結(jié)果：低反應(yīng)組卵泡液中BMP-15(1.11±O．12)顯著高于正常反應(yīng)組(0.96+0.11，P<0.01)，低反應(yīng)組平均SCF水平為164.83+23.97 pg／ml，也顯著高于正常反應(yīng)組139.88±11.24pg／ml，P<0.01。低