富血小板血漿促進(jìn)大鼠脂肪干細(xì)胞增殖和軟骨樣分化.pdf

1、目的:
　　 探討緩沖過的、未激活的富血小板血漿(Buffered PRP)的培養(yǎng)基是否能夠促進(jìn)脂肪基質(zhì)干細(xì)胞(ADSCs)軟骨樣分化和增殖。
　　 方法:
　　 分離、培養(yǎng)Wistar大鼠的ADSCs;采用免疫熒光法進(jìn)行鑒定;從Wistar大鼠動(dòng)脈血中提取PRP,并制備Buffered PRP;ADSCs分別在加有10％Buffered PRP的DMEM培養(yǎng)基和正常DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng);誘導(dǎo)一周后細(xì)胞爬片行免疫

2、組化鑒定Ⅱ型膠原表達(dá),甲苯胺藍(lán)染色鑒定蛋白聚糖表達(dá);將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組于1、3、5、7天行MTT法測(cè)定其增殖活性。
　　 結(jié)果:
　　 成功分離、培養(yǎng)Wistar大鼠的ADSCs:免疫熒光法鑒定細(xì)胞表面標(biāo)志CD44、CD29表達(dá)陽性;在10％Buffered PRP培養(yǎng)基中,甲苯胺藍(lán)可以和細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外基質(zhì)中的硫酸蛋白多糖的硫酸基特異性結(jié)合,在誘導(dǎo)培養(yǎng)7天的細(xì)胞甲苯胺藍(lán)染色可見細(xì)胞漿內(nèi)藍(lán)色異染,蛋白多糖表達(dá)結(jié)果表達(dá)陽性,說

3、明細(xì)胞有較強(qiáng)的蛋白多糖合成能力;實(shí)驗(yàn)組Ⅱ型膠原免疫組化結(jié)果顯示細(xì)胞呈陽性,可見棕黃色顆粒分布于細(xì)胞漿內(nèi),而對(duì)照組則為陰性,并對(duì)免疫組化結(jié)果應(yīng)用SPSS13.0軟件對(duì)其灰度值統(tǒng)計(jì)學(xué)分析P＜0.05,而正常培養(yǎng)基中的細(xì)胞未有明顯變化;將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組于1、3、5、7天行MTT法測(cè)定其增殖活性,MTT檢測(cè)Buffered PRP誘導(dǎo)組較對(duì)照組增殖明顯(P＜0.01)。結(jié)果顯示PRP對(duì)脂肪干細(xì)胞有明顯的促增殖作用。
　　 結(jié)論:

4、　　 本試驗(yàn)研究證明從大鼠脂肪組織中可提取出脂肪干細(xì)胞,在單層培養(yǎng)條件下,實(shí)驗(yàn)組免疫組化Ⅱ型膠原呈陽性,甲苯胺藍(lán)染色也是陽性,對(duì)照組均呈陰性,MTT法測(cè)出實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞較對(duì)照組細(xì)胞增殖明顯,該實(shí)驗(yàn)證明了未激活、緩沖過的10％PRP能夠促進(jìn)脂肪干細(xì)胞的增殖和軟骨方向分化。本實(shí)驗(yàn)中所得到的結(jié)果為軟骨修復(fù)的組織工程學(xué)研究和臨床應(yīng)用提供了新的科學(xué)依據(jù)。Buffered PRP的培養(yǎng)基能夠促進(jìn)脂肪基質(zhì)干細(xì)胞(ADSCs)軟骨樣分化和增殖,為軟骨修復(fù)